16816ES Hieff® Fast Cell Direct qPCR set (for probe)
- 公司名稱 翌圣生物科技（上海）股份有限公司
- 品牌 Yeasen/翌圣生物
- 型號 16816ES
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時間 2025/2/7 13:44:34
- 訪問次數(shù) 310
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企業(yè)簡介
翌圣生物科技（上海）股份有限公司【Yeasen Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd.】是一家以蛋白質(zhì)改造和酶進化技術(shù)為驅(qū)動,，聚焦生命科學產(chǎn)業(yè)鏈上游核心原料,，從事分子、蛋白和細胞三大品類生物試劑的研發(fā),、生產(chǎn)與銷售的高新技術(shù)企業(yè),，通過打通分子酶、蛋白,、抗體,、核酸、細胞的技術(shù)開發(fā)路徑,，成為國內(nèi)少數(shù)同時覆蓋三大品類生物試劑,、兼?zhèn)浜诵募夹g(shù)自主研發(fā)能力和規(guī)模化生產(chǎn)能力的高新技術(shù)企業(yè),，產(chǎn)品廣泛應用于生命科學研究領(lǐng)域,、診斷與檢測領(lǐng)域和生物醫(yī)藥領(lǐng)域。
主營業(yè)務
公司憑借在蛋白質(zhì)改造和酶進化領(lǐng)域的技術(shù)優(yōu)勢和深耕生物試劑行業(yè)多年積累的豐富經(jīng)驗,，構(gòu)建了品質(zhì)優(yōu)良,、類型齊全、種類豐富的產(chǎn)品管線,。自公司成立以來,，公司研發(fā)、生產(chǎn)和銷售的生物試劑超過3000種,，涵蓋分子,、蛋白,、細胞三大品類的生物試劑，能夠滿足客戶多種類型生物試劑的一體化采購需求,。公司核心產(chǎn)品覆蓋qPCR系列,、NGS系列、逆轉(zhuǎn)錄系列,、核酸提取與純化系列,、PCR系列、分子克隆系列,、體外轉(zhuǎn)錄系列,、抗體、蛋白純化系列,、蛋白分析系列,、重組蛋白、細胞分析系列,、細胞培養(yǎng)系列,、細胞轉(zhuǎn)染系列、報告基因檢測系列等多個品類的生物試劑,，廣泛應用于生命科學研究,、診斷檢測和生物醫(yī)藥等領(lǐng)域。
發(fā)展歷程
榮譽資質(zhì)
翌圣生物通過申請商標和軟件著作權(quán)的方式保障核心技術(shù)和市場競爭力,，不斷加強公司品牌建設(shè),。截至2022年3月31日，公司已經(jīng)獲得授權(quán)18項（其中發(fā)明14項,、實用新型1項,、外觀設(shè)計3項）和45項與生物試劑相關(guān)的軟件著作權(quán)，擁有經(jīng)國家知識產(chǎn)權(quán)局商標局核準的注冊商標權(quán)37項以及4項境外注冊商標,，是國家高新技術(shù)企業(yè)和上海市專精特新企業(yè),。
創(chuàng)新平臺
經(jīng)過多年的產(chǎn)品研發(fā)技術(shù)經(jīng)驗的沉淀以及持續(xù)的研發(fā)創(chuàng)新，翌圣生物積極開展“產(chǎn)學研”合作,，與擁有生物催化與酶領(lǐng)域國家重點實驗室的湖北大學,、擁有教育部工業(yè)生物領(lǐng)域重點研究基地的江南大學展開合作，優(yōu)化生物試劑關(guān)鍵原料的生產(chǎn)和表達工藝,。翌圣生物以基因工程技術(shù),、生物信息技術(shù)、細胞生物學技術(shù),、免疫學技術(shù),、生化分析技術(shù)等生命科學領(lǐng)域的共性生物技術(shù)為基礎(chǔ)，建立了六大核心技術(shù)平臺——雙向分子酶理性設(shè)計與定向進化平臺,、密度發(fā)酵與超潔凈純化平臺,、分子診斷試劑關(guān)鍵原料研發(fā)平臺,、高通量測序建庫試劑創(chuàng)新研發(fā)平臺、高性能單克隆抗體研發(fā)平臺和mRNA醫(yī)藥應用研發(fā)平臺,，目前已經(jīng)自主研發(fā)出20項核心技術(shù),，打通分子酶、蛋白,、抗體,、核酸、細胞的技術(shù)開發(fā)路徑,，覆蓋技術(shù)研發(fā),、產(chǎn)品升級、規(guī)模生產(chǎn)和質(zhì)量控制等生物試劑研發(fā)和生產(chǎn)的各關(guān)鍵環(huán)節(jié),。
工業(yè)化生產(chǎn)
翌圣生物擁有按照準GMP 標準建設(shè)運營的工業(yè)化生產(chǎn)基地,，配有噸級發(fā)酵線、工業(yè)級 AKTA 純化線和全自動包裝線,。同時,，公司通過了ISO 13485:2016質(zhì)量管理體系認證，從原料控制,、生產(chǎn)管理,、質(zhì)檢管控,、倉儲運輸?shù)葘ιa(chǎn)線進行360度管理監(jiān)督,，保證產(chǎn)品過程的可控制性及可追溯性，竭盡全力為您提供可靠的產(chǎn)品,。
客戶服務
翌圣生物憑借優(yōu)質(zhì)穩(wěn)定的產(chǎn)品質(zhì)量,、高效及時的響應能力、快速穩(wěn)定的交付能力和周到完備的售后服務獲得了眾多科研用戶和工業(yè)用戶的認可,，為檢測公司,、治療公司、工具類公司和科學研究實驗室提供應用于科學研究,、體外診斷,、基因測序、生物醫(yī)藥等的生物試劑,。與中國科學院,、清華大學、北京大學,、復旦大學,、上海交通大學、浙江大學等頂尖科研院所和華大基因,、恒瑞醫(yī)藥,、藥明康德,、之江生物、圣湘生物,、斯微生物,、金斯瑞、思路迪等工業(yè)客戶建立了穩(wěn)定,、緊密的合作關(guān)系,，公司產(chǎn)品被多次使用在Nature、Science,、Cell等國際頂級期刊論文發(fā)表中,。
公司企業(yè)文化
幫助客戶創(chuàng)造價值，讓世界更健康更快樂
◎ 成為生命科學工具領(lǐng)域全球Top⑩
◎ 具備驅(qū)動產(chǎn)業(yè)變革的技術(shù)創(chuàng)新能力
◎ 擁有一支持續(xù)學習型的翌圣鐵軍
翌圣生物始終秉承“幫助客戶創(chuàng)造價值,，讓世界更健康更快樂”的使命,，專注于技術(shù)創(chuàng)新和產(chǎn)品升級，不斷拓展核心技術(shù)的應用領(lǐng)域,，為客戶提供更為的產(chǎn)品與服務,，助力我國打造自主可控的生物試劑產(chǎn)業(yè)鏈。同時,，翌圣生物將進一步推進國際化戰(zhàn)略,，繼續(xù)布局和拓展海外市場，為全球生物試劑產(chǎn)業(yè)發(fā)展貢獻力量,。
分子生物學試劑,，細胞生物學試劑，免疫學試劑,，蛋白組學試劑等
| 供貨周期 | 兩周 | 應用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè) |
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Hieff® Fast Cell Direct Probe RT-qPCR Kit 適用于對各種動物細胞進行基因定量表達分析（如cell line 化的貼壁細胞和懸浮細胞,、原代培養(yǎng)細胞、各種干細胞,、iPS 細胞等）,，無需提RNA，可直接進行qPCR表達分析,，用時短,，操作簡單，出錯率低,，最短只需1.5 h就可高效完成從模板制備到反轉(zhuǎn)錄反應及基因表達分析等步驟,。該產(chǎn)品為探針法細胞直擴RT-qPCR試劑盒的熒光定量qPCR模塊，為補充試劑,。
儲存條件
長期保存時請于-25~-15℃保存,，有效期1年。
使用說明
一,、裂解產(chǎn)物的制備
將試劑放置室溫下融化,，使用前上下顛倒,，輕輕混勻，并輕微離心后使用,，避免起泡,。沒有混勻試劑、使用振蕩器混勻,、未在冰上配置試劑等會導致反應性能下降,。
將細胞轉(zhuǎn)移至離心管中*，5000 rpm離心2 min收集細胞**,，充分吸除培養(yǎng)基,。若貼壁細胞在96孔板中培養(yǎng)，可直接吸除培養(yǎng)基,。
各個孔內(nèi)加入FCD Washing Buffer 150 μL,，吸打清洗細胞，5000 rpm離心2 min,，吸盡FCD Washing Buffer,。
各孔中加入48 μL FCD Lysis Buffer溶液，2 μL DNase I溶液,，室溫吸打混勻后靜置5 min,，孵育后加入2.5 μL FCD Stop Solution***, 吸打混勻5次左右，即可得到裂解產(chǎn)物****,，細胞數(shù)量超過1× 105 cells時可能會有裂解殘留物屬正?，F(xiàn)象。
*50 μL裂解體系適配細胞數(shù)的基本要求是每孔1× 102 - 1× 105 cells,，若細胞數(shù)量較多,，可適當?shù)缺壤黾覨CD Lysis Buffer溶液和DNase Ⅰ溶液的用量,。
**不同細胞的離心條件不同,，請使用適合于所用細胞的離心速度進行離心。
***50 μL的裂解液需加入2.5 μL的FCD Stop Solution,。依實驗需要,，加入裂解液量增大時需相應增大FCD Stop Solution的量。
****細胞裂解產(chǎn)物溶液長期保存時,，請置于-25~-15℃,。
二、反轉(zhuǎn)錄
室溫融化4× Hifair® FCD RT Mix后輕微顛倒混勻,，置于冰上并按下表配置反應體系：
組分 | 體積 （μL） | 終濃度 |
4× Hifair® FCD RT Mix | 5 | 1× |
裂解產(chǎn)物* | x | - |
RNase-free H2O | Up to 20 | - |
表1 反轉(zhuǎn)錄反應體系
*避免吸入細胞碎片,，推薦使用量為2 μl，最大不超過反應體系的55%,。
移液器輕輕混勻上述配制的反應液,，按下表程序進行反轉(zhuǎn)錄反應**：
反應溫度 | 反應時間 |
37℃ | 5 min |
85℃ | 5 sec |
表2 反轉(zhuǎn)錄反應程序
**反轉(zhuǎn)錄溫度推薦使用37℃,，反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可直接進行下游qRT-PCR檢測。為避免反轉(zhuǎn)錄體系對qPCR反應的抑制,，得到合適的Ct值（10-35）,，可將產(chǎn)物稀釋10-1000倍后使用。若短時間內(nèi)不進行下游實驗,，可放置于-25~-15℃保存,。
三、熒光定量PCR
體系配置
使用下列組份比例配制反應液（配制過程請于冰上進行）：
組分 | 體積（μL） | 終濃度 |
2× Hieff® FCD Probe qPCR Mix | 12.5 | 1× |
Forward Primer (10 μM) | 0.5 | 200 nM |
Reverse Primer (10 μM) | 0.5 | 200 nM |
Probe (10 μM) | 0.25-1 | 100-400 nM |
反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物* | x | - |
RNase-free H2O | Up to 25 | - |
表3 qPCR反應體系
*高濃度模板易導致非特異擴增,，可適當將模板稀釋5-50倍,。模板推薦用量4 μL。反應性能較差時,，可以在0.2-1.0 μM范圍內(nèi)調(diào)整引物探針濃度,。
熒光定量PCR快速擴增程序（推薦）
本產(chǎn)品推薦使用快速程序擴增，可大大減少反應時間,。使用Tm值較低的引物難以擴增時,，可額外調(diào)整退火溫度。
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
預變性 | 95℃ | 10 sec | 1 |
變性 | 95℃ |
| 45 |
退火/延伸** | 60℃ | 10 sec |
表4 qPCR反應程序（快速）
**退火/延伸溫度,、終延伸時間可根據(jù)實驗要求適當調(diào)整,。 快速程序適用于絕大多數(shù)基因，個別復雜二級結(jié)構(gòu)基因可嘗試常規(guī)程序,。
熒光定量PCR常規(guī)擴增程序
實驗儀器不滿足快速反應時間時,，也可使用常規(guī)程序進行擴增。
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
預變性 | 95℃ | 10 sec | 1 |
變性 | 95℃ |
| 40-45 |
退火/延伸** | 60℃ | 30 sec |
表5 qPCR反應程序（常規(guī)）
注意事項
使用前,，將凍存的各組分充分融解并輕輕混勻后使用,。
實驗時，請盡量使用無污染的耗材,，避免污染,。
本產(chǎn)品避免反復凍融，配制時應避免強光照射,。
為了您的安全和健康,，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
本產(chǎn)品僅作科研用途,！
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