INTERFERin® siRNA/miRNA體外轉(zhuǎn)染試劑
- 公司名稱 翌圣生物科技（上海）股份有限公司
- 品牌 Polyplus
- 型號(hào)
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時(shí)間 2023/3/15 9:02:09
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企業(yè)簡(jiǎn)介
翌圣生物科技（上海）股份有限公司【Yeasen Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd.】是一家以蛋白質(zhì)改造和酶進(jìn)化技術(shù)為驅(qū)動(dòng),，聚焦生命科學(xué)產(chǎn)業(yè)鏈上游核心原料,，從事分子,、蛋白和細(xì)胞三大品類生物試劑的研發(fā),、生產(chǎn)與銷售的高新技術(shù)企業(yè),，通過(guò)打通分子酶,、蛋白,、抗體、核酸、細(xì)胞的技術(shù)開發(fā)路徑,，成為國(guó)內(nèi)少數(shù)同時(shí)覆蓋三大品類生物試劑、兼?zhèn)浜诵募夹g(shù)自主研發(fā)能力和規(guī)?；a(chǎn)能力的高新技術(shù)企業(yè)，產(chǎn)品廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)研究領(lǐng)域,、診斷與檢測(cè)領(lǐng)域和生物醫(yī)藥領(lǐng)域,。
主營(yíng)業(yè)務(wù)
公司憑借在蛋白質(zhì)改造和酶進(jìn)化領(lǐng)域的技術(shù)優(yōu)勢(shì)和深耕生物試劑行業(yè)多年積累的豐富經(jīng)驗(yàn),，構(gòu)建了品質(zhì)優(yōu)良,、類型齊全,、種類豐富的產(chǎn)品管線,。自公司成立以來(lái),，公司研發(fā),、生產(chǎn)和銷售的生物試劑超過(guò)3000種，涵蓋分子,、蛋白,、細(xì)胞三大品類的生物試劑,，能夠滿足客戶多種類型生物試劑的一體化采購(gòu)需求,。公司核心產(chǎn)品覆蓋qPCR系列,、NGS系列,、逆轉(zhuǎn)錄系列,、核酸提取與純化系列、PCR系列,、分子克隆系列,、體外轉(zhuǎn)錄系列,、抗體、蛋白純化系列,、蛋白分析系列,、重組蛋白、細(xì)胞分析系列,、細(xì)胞培養(yǎng)系列,、細(xì)胞轉(zhuǎn)染系列、報(bào)告基因檢測(cè)系列等多個(gè)品類的生物試劑,，廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)研究,、診斷檢測(cè)和生物醫(yī)藥等領(lǐng)域。
發(fā)展歷程
榮譽(yù)資質(zhì)
翌圣生物通過(guò)申請(qǐng)商標(biāo)和軟件著作權(quán)的方式保障核心技術(shù)和市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力,，不斷加強(qiáng)公司品牌建設(shè)。截至2022年3月31日,，公司已經(jīng)獲得授權(quán)18項(xiàng)（其中發(fā)明14項(xiàng),、實(shí)用新型1項(xiàng),、外觀設(shè)計(jì)3項(xiàng)）和45項(xiàng)與生物試劑相關(guān)的軟件著作權(quán)，擁有經(jīng)國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局商標(biāo)局核準(zhǔn)的注冊(cè)商標(biāo)權(quán)37項(xiàng)以及4項(xiàng)境外注冊(cè)商標(biāo),，是國(guó)家高新技術(shù)企業(yè)和上海市專精特新企業(yè),。
創(chuàng)新平臺(tái)
經(jīng)過(guò)多年的產(chǎn)品研發(fā)技術(shù)經(jīng)驗(yàn)的沉淀以及持續(xù)的研發(fā)創(chuàng)新，翌圣生物積極開展“產(chǎn)學(xué)研”合作,，與擁有生物催化與酶領(lǐng)域國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室的湖北大學(xué),、擁有教育部工業(yè)生物領(lǐng)域重點(diǎn)研究基地的江南大學(xué)展開合作，優(yōu)化生物試劑關(guān)鍵原料的生產(chǎn)和表達(dá)工藝,。翌圣生物以基因工程技術(shù),、生物信息技術(shù)、細(xì)胞生物學(xué)技術(shù),、免疫學(xué)技術(shù),、生化分析技術(shù)等生命科學(xué)領(lǐng)域的共性生物技術(shù)為基礎(chǔ)，建立了六大核心技術(shù)平臺(tái)——雙向分子酶理性設(shè)計(jì)與定向進(jìn)化平臺(tái),、密度發(fā)酵與超潔凈純化平臺(tái),、分子診斷試劑關(guān)鍵原料研發(fā)平臺(tái)、高通量測(cè)序建庫(kù)試劑創(chuàng)新研發(fā)平臺(tái),、高性能單克隆抗體研發(fā)平臺(tái)和mRNA醫(yī)藥應(yīng)用研發(fā)平臺(tái),，目前已經(jīng)自主研發(fā)出20項(xiàng)核心技術(shù)，打通分子酶,、蛋白,、抗體、核酸,、細(xì)胞的技術(shù)開發(fā)路徑,，覆蓋技術(shù)研發(fā)、產(chǎn)品升級(jí),、規(guī)模生產(chǎn)和質(zhì)量控制等生物試劑研發(fā)和生產(chǎn)的各關(guān)鍵環(huán)節(jié),。
工業(yè)化生產(chǎn)
翌圣生物擁有按照準(zhǔn)GMP 標(biāo)準(zhǔn)建設(shè)運(yùn)營(yíng)的工業(yè)化生產(chǎn)基地，配有噸級(jí)發(fā)酵線,、工業(yè)級(jí) AKTA 純化線和全自動(dòng)包裝線,。同時(shí)，公司通過(guò)了ISO 13485:2016質(zhì)量管理體系認(rèn)證,，從原料控制,、生產(chǎn)管理、質(zhì)檢管控,、倉(cāng)儲(chǔ)運(yùn)輸?shù)葘?duì)生產(chǎn)線進(jìn)行360度管理監(jiān)督,，保證產(chǎn)品過(guò)程的可控制性及可追溯性，竭盡全力為您提供可靠的產(chǎn)品,。
客戶服務(wù)
翌圣生物憑借優(yōu)質(zhì)穩(wěn)定的產(chǎn)品質(zhì)量,、高效及時(shí)的響應(yīng)能力,、快速穩(wěn)定的交付能力和周到完備的售后服務(wù)獲得了眾多科研用戶和工業(yè)用戶的認(rèn)可，為檢測(cè)公司,、治療公司,、工具類公司和科學(xué)研究實(shí)驗(yàn)室提供應(yīng)用于科學(xué)研究、體外診斷,、基因測(cè)序,、生物醫(yī)藥等的生物試劑。與中國(guó)科學(xué)院,、清華大學(xué),、北京大學(xué)、復(fù)旦大學(xué),、上海交通大學(xué),、浙江大學(xué)等頂尖科研院所和華大基因、恒瑞醫(yī)藥,、藥明康德,、之江生物、圣湘生物,、斯微生物,、金斯瑞、思路迪等工業(yè)客戶建立了穩(wěn)定,、緊密的合作關(guān)系,，公司產(chǎn)品被多次使用在Nature、Science,、Cell等國(guó)際頂級(jí)期刊論文發(fā)表中,。
公司企業(yè)文化
幫助客戶創(chuàng)造價(jià)值，讓世界更健康更快樂(lè)
◎ 成為生命科學(xué)工具領(lǐng)域全球Top⑩
◎ 具備驅(qū)動(dòng)產(chǎn)業(yè)變革的技術(shù)創(chuàng)新能力
◎ 擁有一支持續(xù)學(xué)習(xí)型的翌圣鐵軍
翌圣生物始終秉承“幫助客戶創(chuàng)造價(jià)值,，讓世界更健康更快樂(lè)”的使命,，專注于技術(shù)創(chuàng)新和產(chǎn)品升級(jí)，不斷拓展核心技術(shù)的應(yīng)用領(lǐng)域,，為客戶提供更為的產(chǎn)品與服務(wù),，助力我國(guó)打造自主可控的生物試劑產(chǎn)業(yè)鏈。同時(shí),，翌圣生物將進(jìn)一步推進(jìn)國(guó)際化戰(zhàn)略,，繼續(xù)布局和拓展海外市場(chǎng)，為全球生物試劑產(chǎn)業(yè)發(fā)展貢獻(xiàn)力量,。
分子生物學(xué)試劑,，細(xì)胞生物學(xué)試劑，免疫學(xué)試劑，蛋白組學(xué)試劑等
| 供貨周期 | 一周 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
|---|
INTERFERin®in vitro siRNA/miRNA transfection reagent
INTERFERin® siRNA/miRNA體外轉(zhuǎn)染試劑
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號(hào) | 規(guī)格 | 價(jià)格（元） |
INTERFERin®in vitro siRNA/miRNA transfection reagent INTERFERin® siRNA/miRNA體外轉(zhuǎn)染試劑 | 409-01 | 0.1 mL | 655.00 |
409-10 | 1 mL | 3135.00 |
產(chǎn)品描述
INTERFERin®是Polyplus公司提供的一款非脂質(zhì)體PEI陽(yáng)離子,、兩性分子轉(zhuǎn)染試劑,，專門為將siRNA/miRNA轉(zhuǎn)染到哺乳動(dòng)物細(xì)胞中而開發(fā),。這種轉(zhuǎn)染試劑包裹siRNA或miRNA形成陽(yáng)離子復(fù)合物,，該復(fù)合物與細(xì)胞表面帶負(fù)電的蛋白聚糖相互作用吸附在細(xì)胞表面，通過(guò)內(nèi)吞進(jìn)入細(xì)胞,，形成內(nèi)含體,。該轉(zhuǎn)染試劑具有質(zhì)子海綿的作用，能夠吸收溶酶體中的H+,，質(zhì)子的不斷流入,，導(dǎo)致復(fù)合體腫脹破裂，從而使外源siRNA或miRNA釋放到細(xì)胞質(zhì)中,。
INTERFERin®可在廣泛的細(xì)胞系中,，實(shí)現(xiàn)1 nM的siRNA超過(guò)90%的表達(dá)效率，避免了脫靶效應(yīng),。適用于多種細(xì)胞轉(zhuǎn)染,，包括Hela、MCF-7,、NIH-3T3等貼壁細(xì)胞,；對(duì)于難以轉(zhuǎn)染的懸浮細(xì)胞系，如K562或THP-1細(xì)胞,，siRNA終濃度為5nM時(shí),，可達(dá)到80%的沉默效率；同時(shí)還可以轉(zhuǎn)染原代人成纖維細(xì)胞和原代人肝細(xì)胞等,，可達(dá)到80%的沉默效率,。除此之外，也可根據(jù)轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系,、核酸種類,、轉(zhuǎn)染時(shí)間等，登錄Polyplus公司的網(wǎng)///址,，搜索該產(chǎn)品引文數(shù)據(jù)庫(kù),。Polyplus數(shù)據(jù)庫(kù)提供了400多種的轉(zhuǎn)染條件數(shù)據(jù)可供參考，Polyplus：w/w/w.polyplus transfection.c/o/m.
運(yùn)輸與保存方法
冰袋（wet ice）運(yùn)輸,。產(chǎn)品4 ºC保存,，一年有效。不可冷凍,！
注意事項(xiàng)
1）整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程使用無(wú)RNA酶和無(wú)熱原性的材料,，如離心管、槍頭、緩沖液,。
2）轉(zhuǎn)染前,，確保siRNA/miRNA是經(jīng)過(guò)PAGE純化和脫鹽處理過(guò)的，高純度的siRNA或者miRNA有助于獲得較高的轉(zhuǎn)染效率,。
3）INTERFERin®轉(zhuǎn)染試劑應(yīng)該在4 ºC保存,，要注意避免多次反復(fù)長(zhǎng)時(shí)間開蓋，否則可能會(huì)導(dǎo)致轉(zhuǎn)染試劑揮發(fā),，降低轉(zhuǎn)染效率,。
4）轉(zhuǎn)染前一天，確保接種貼壁細(xì)胞密度在30%-50%,，對(duì)于一些小細(xì)胞和生長(zhǎng)緩慢的細(xì)胞,，接種密度可適當(dāng)擴(kuò)大2倍。
5）轉(zhuǎn)染前,，確保siRNA/miRNA基因沉默表達(dá)不會(huì)影響細(xì)胞活力,。
6）該產(chǎn)品只適合體外轉(zhuǎn)染，不能用于體內(nèi)轉(zhuǎn)染,。
操作流程
一．貼壁細(xì)胞轉(zhuǎn)染（以24孔板和轉(zhuǎn)染1 nM siRNA為例,，其他培養(yǎng)板加樣體積請(qǐng)參考表1）
為了提高轉(zhuǎn)染效率，建議在轉(zhuǎn)染前一天接種細(xì)胞,，接種細(xì)胞密度建議30%-50%,，建議初次使用時(shí)設(shè)置梯度進(jìn)行優(yōu)化//佳使用量。
【注】：由于靶基因,、細(xì)胞類型,、siRNA效價(jià)、靶mRNA的半衰期和靶蛋白的周轉(zhuǎn)率等因素,，均會(huì)影響siRNA的轉(zhuǎn)染效率,。建議選取siRNA濃度在1 nM到10 nM之間。轉(zhuǎn)染試劑的體積應(yīng)根據(jù)siRNA濃度和培養(yǎng)皿的大小進(jìn)行調(diào)整,，請(qǐng)參見下表1,。
表1 siRNA終濃度為1 nM時(shí)，轉(zhuǎn)染試劑,、培養(yǎng)基的用量參考值
培養(yǎng)皿 | siRNA物質(zhì)的量(pmoles) | 每孔siRNA的含量（ng） | INTERFERin®轉(zhuǎn)染試劑體積（µL） | siRNA-INTERFERin®復(fù)合物的體積V1（µL） | *培養(yǎng)基的體積V2 | 終體積（V=V1+V2） |
96孔板 | 0.17 | 2.4 | 0.75 ± 0.5 | 50 | 125 µL | 175 µL |
24孔板 | 0.6 | 8.4 | 2 ± 1 | 100 | 500 µL | 600 µL |
12孔板 | 1.2 | 17 | 4 ± 2 | 200 | 1 mL | 1.2 mL |
6孔板 | 2.2 | 31 | 8 ± 4 | 200 | 2 mL | 2.2 mL |
25 cm2培養(yǎng)瓶 | 4.4 | 62 | 15 ± 5 | 400 | 4 mL | 4.4 mL |
75 cm2培養(yǎng)瓶 | 10.5 | 147 | 40 ± 10 | 500 | 10 mL | 10.5 mL |
表2 siRNA終濃度為10~50 nM時(shí),，轉(zhuǎn)染試劑、培養(yǎng)基的用量參考值
培養(yǎng)皿 | INTERFERin®轉(zhuǎn)染試劑體積（µL） | siRNA-INTERFERin®復(fù)合物的體積V1（µL） | *培養(yǎng)基的體積V2 | 終體積V（V=V1+V2） |
96孔板 | 1 ± 0.5 | 50 | 125 µL | 175 µL |
24孔板 | 3 ± 1 | 100 | 500 µL | 600 µL |
12孔板 | 6 ± 2 | 200 | 1 mL | 1.2 mL |
6孔板 | 12 ± 4 | 200 | 2 mL | 2.2 mL |
25cm2培養(yǎng)瓶 | 20 ± 5 | 400 | 4 mL | 4.4 mL |
二．懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染（以24孔板和轉(zhuǎn)染5 nM siRNA為例,，其他培養(yǎng)板加樣體積請(qǐng)參考表4）
接種細(xì)胞
1.為了優(yōu)化懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染條件,，與貼壁細(xì)胞相比，需要降低懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)基的體積,。根據(jù)培養(yǎng)皿大小和完整培養(yǎng)基的體積,，推薦的接種懸浮細(xì)胞的數(shù)量如下表3所示,。
表3 轉(zhuǎn)染當(dāng)天，根據(jù)培養(yǎng)皿的大小,，接種懸浮細(xì)胞數(shù)量參考值
培養(yǎng)皿 | 每孔接種細(xì)胞懸浮液體積（μL） | 轉(zhuǎn)染當(dāng)天接種細(xì)胞數(shù) |
384孔板 | 25 | 5 ×103~1×104 |
96孔板 | 50 | 1×104~ ×104 |
24孔板 | 200 | 1×105 ~ 2×105 |
12孔板 | 500 | 2×105 ~ 4×105 |
6孔板 | 1000 | 5×105 ~ 2×106 |
25 cm2培養(yǎng)瓶 | 2000 | 2×106~ 5×106 |
2.按照以下體系配制siRNA-INTERFERin®復(fù)合物：
1）對(duì)于每孔細(xì)胞,，使用100 μL無(wú)血清培養(yǎng)基（如OPTI-MEMⅠ培養(yǎng)基）稀釋21 ng siRNA (1.5 pmols)，混勻,。
2）向100 μL的siRNA中加入4 μL的轉(zhuǎn)染試劑,，立刻旋渦10秒，充分混勻,。
3）在室溫孵育15 min,，使得形成siRNA-INTERFERin®復(fù)合物,。
【注】：孵育時(shí)間不要超過(guò)30 min
4）在每孔200 μL細(xì)胞懸浮液中,，加入100 μL的siRNA-INTERFERin®復(fù)合物，輕輕混勻,。終體積為300 µL,，siRNA終濃度為5 nM。
5）37 ℃,，5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)4-6 h后,，再加入700 µL*培養(yǎng)基，輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)板使其混勻,。
6）繼續(xù)放入培養(yǎng)箱中孵育,，直至目的基因表達(dá)。建議一般mRNA表達(dá)水平通常在24-72 h,，蛋白表達(dá)水平在48-96 h,。
【注】：為了優(yōu)化內(nèi)源性基因沉默，建議選取siRNA濃度在5 nM到20 nM之間,。轉(zhuǎn)染試劑的體積應(yīng)根據(jù)siRNA濃度和培養(yǎng)皿的大小進(jìn)行調(diào)整,，請(qǐng)參見下表4。
表4 siRNA濃度為5 nM時(shí),，在懸浮細(xì)胞中的參考值
培養(yǎng)皿 | 懸浮細(xì)胞的體積 | siRNA的濃度(pmoles) | 每孔siRNA的含量（ng） | 轉(zhuǎn)染試劑體積（µL） | siRNA-INTERFERin®復(fù)合物的體積（µL） | 轉(zhuǎn)染4-6h后另加入培養(yǎng)基的體積 |
384孔板 | 25 µL | 0.25 | 3.75 | 1 ± 0.5 | 25 | 0 µL |
96孔板 | 50 µL | 0.5 | 7.5 | 2 ± 1 | 50 | 100 µL |
24孔板 | 200 µL | 1.5 | 21 | 3 ± 2 | 100 | 700 µL |
12孔板 | 500 µL | 3.5 | 49 | 6 ± 4 | 200 | 1 mL |
6孔板 | 1 mL | 6 | 84 | 10 ± 8 | 200 | 2 mL |
25cm2培養(yǎng)瓶 | 2 mL | 12 | 168 | 15 ±10 | 400 | 4 mL |
表5 懸浮細(xì)胞中siRNA濃度,、轉(zhuǎn)染試劑的用量參考值
siRNA的終濃度/孔 | 培養(yǎng)皿 | INTERFERin®轉(zhuǎn)染試劑的體積/孔 |
1 ~ 20 nM
| 386孔板 | 1 ± 0.5 µL |
96孔板 | 2 ± 1 µL | |
24孔板 | 3 ± 2 µL | |
6孔板 | 10 ± 8 µL | |
20 ~ 50 nM | 386孔板 | 1.5 ± 0.5 µL |
96孔板 | 3 ± 1 µL | |
24孔板 | 5 ± 2 µL | |
6孔板 | 15 ± 8 µL |
三．miRNA轉(zhuǎn)染操作流程
該轉(zhuǎn)染試劑也適合轉(zhuǎn)染miRNA，轉(zhuǎn)染貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞的具體操作請(qǐng)參考siRNA的操作流程,。
相關(guān)產(chǎn)品
產(chǎn)品名稱 | 貨號(hào) | 規(guī)格 | 價(jià)格（元） |
jetPRIME®in vitro DNA & siRNA transfection reagent | 114-01 | 0.1 mL | 835.00 |
114-15 | 1.5 mL | 6395.00 | |
jetOPTIMUS® in vitro DNA transfection reagent | 117-01 | 0.1 mL | 835.00 |
117-15 | 1.5 mL | 6855.00 | |
jetPEI®DNA transfection, HTS application | 101-10N | 1 mL | 4565.00 |
INTERFERin®in vitro siRNA/miRNA transfection reagent | 409-01 | 0.1 mL | 655.00 |
409-10 | 1 mL | 3135.00 |
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