雙熒光素酶檢測 基因編輯

雙熒光素酶報告基因檢測介紹

實驗原理

miRNA通過堿基配對結(jié)合到靶mRNA的3’UTR區(qū)，抑制靶基因的翻譯或?qū)Π谢騧RNA的降解達(dá)到調(diào)控基因表達(dá)的目的,。將靶mRNA的3’UTR區(qū)構(gòu)建至螢火蟲熒光素酶報告基因的3’端,，與miRNA表達(dá)載體及海腎熒光素酶報告基因載體共轉(zhuǎn)染細(xì)胞，先后加入兩種底物熒光素,，通過對熒光素酶報告基因的表達(dá)檢測確認(rèn) miRNA對靶基因的調(diào)控效果,。

下圖為雙熒光素酶報告基因檢測載體的示意圖。

技術(shù)應(yīng)用

通過miRNA靶標(biāo)的鑒定從而進(jìn)行miRNA功能的深入研究,。

實驗流程

實驗結(jié)果展示

圖 1 hsa-miR-9-1 的靶點

篩選結(jié)果

1）四組質(zhì)粒的 293 細(xì)胞共轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞照片,；

2）四組細(xì)胞的雙熒光素酶報告基因檢測柱形圖。

注：WT為野生型3'UTR 區(qū)的螢火蟲熒光素酶報告基因質(zhì)粒，Mut為突變型3'UTR 區(qū)的螢火蟲熒光素酶報

告基因質(zhì)粒,，結(jié)果表明待研究的 miRNA 對靶基因有較明顯的調(diào)控作用,。

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