高濃度基質膠-含酚紅

貨號：MG2248、MG4248,、MG6248

存儲條件：-80℃ 保存,，避免反復凍融,。

產品簡介：

基質膠是從Engelbreth-Holm-Swarm (EHS) 小鼠肉瘤提取的可溶性細胞培養(yǎng)基質,，含有豐富的細胞外基質蛋白，主要包括層粘連蛋白,、膠原IV、肝素硫酸酯蛋白聚糖,、巢蛋白以及大量的生長因子,。

基底膠在室溫條件下，聚合形成具有生物學活性的三維基質,，模擬體內細胞基底膜的結構,、組成、物理特性和功能,，有利于體外細胞的培養(yǎng)和分化,，以及對細胞形態(tài)、生化功能,、遷移,、侵染和基因表達的研究?；|膠也適用于類器官生長,、分化、代謝和毒理學研究,。高濃度的基質膠可以用于動物體內成瘤實驗的細胞包被,。

操作方法：

一、薄膠成膠方法：

1. 凍融后,，用預冷的移液槍頭混勻基質膠成勻漿狀,。

2. 將需要使用的培養(yǎng)板置于冰上，加入濃度為50μL/cm2 生長面積的基質膠,。

3. 在 37℃放置 30 分鐘,，即可使用,。

二,、厚膠成膠方法：

1. 凍融后，用預冷的移液槍頭混勻基質膠成勻漿狀,。

2. 將需要使用的培養(yǎng)板置于冰浴，將培養(yǎng)的細胞與基質膠混合,，用移液槍頭使其懸浮于基質中。加入濃度為 150-200μL/cm

2 生長面積的基質膠,。

3. 在 37℃放置 30 分鐘，可成膠,?？梢约尤爰毎囵B(yǎng)的基質，也可使細胞直接生長在膠表面,。

三,、薄層包被方法：

1. 凍融后，用預冷的移液槍頭混勻基質膠成勻漿狀,。

2. 根據使用需要,，采用無血清培養(yǎng)基稀釋基質膠。根據實驗需要確定最佳包被濃度,。

3. 將稀釋的 基質膠包被于所需的培養(yǎng)器皿中，包被量至少覆蓋整個器皿的生長表面,。室溫下孵育 1 小時,。

4. 去除未結合的基質膠，用無血清培養(yǎng)基輕輕地沖洗,。

四,、裸鼠成瘤實驗

1.取處于對數(shù)生長期腫瘤細胞,，即細胞融合度達到80%~90%,。

2.棄去瓶內培養(yǎng)液，用PBS清洗2遍,，加入0.25%含EDTA的yimei0.8~1.0 ml中,，將培養(yǎng)瓶平放靜置1 min，倒置顯微鏡下觀察細胞狀態(tài),，在細胞逐漸變圓或有細胞脫落時加入5 mlwanquan培養(yǎng)液終止消化,。

3.吹打管輕柔吹打細胞懸液,，進行細胞計數(shù),。

4.取一定數(shù)量（每只小鼠不低于1X10^5細胞量，最高不超過1X10^7細胞/0.1ml終濃度）細胞放入15 ml離心管中,，200×g離心3 min,，棄上清液,，用已預冷的移液器及吸頭將基質膠和含10%FBS的腫瘤細胞wanquan培養(yǎng)液的1∶1混懸液加入離心管，輕柔吹打,，避免產生氣泡,，均勻重懸細胞，冰上放置,。

5.麻醉5-6w齡的裸鼠,，提前預冷微量進樣器和針頭，用不帶針頭的 1mL 注射器將細胞和膠的混合物吸入針頭,，再裝上16G-29G針頭在每只裸鼠右側背部皮下接種,，左右輕柔晃動，預留細胞懸液空間,，注射量為400 μl/只,。

6.動物經過上述處理后，每周定期觀察裸鼠生長狀況,，用游標卡尺對瘤體的長度（L）、寬度（W）進行測量,。體積大小按公式：V=1/2LW2進行計算,。

注意事項：

1.收到產品并確認到貨情況無異常后，請將 基質膠儲存于--80℃冰箱,，短暫使用可置于--20℃冰箱,。切勿將基質膠儲存于自動除霜的冰箱中。在第一次融化后請分裝保存,，應避免基質膠反復凍融,。

2.因基質膠在 10℃以上即可成膠，在操作過程中,，保持基質膠一直置于冰上,，所有接觸的細胞培養(yǎng)器皿，移液吸頭,，分裝管等都必須預冷后使用,。

3.所有操作均需在無菌環(huán)境下進行，試劑瓶瓶蓋可用 70％乙醇擦拭，并自然干燥,。應使用預冷的移液器以保證基質膠呈勻漿狀,。

溶解時可將基質膠基質置于 4℃冰箱內冰上過夜溶解。成膠后基質膠可以在 4℃ 24－48 小時后重新呈液態(tài),。