輔酶Q10同源物B(COQ10B)重組蛋白
- 公司名稱 上海研生實業(yè)有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號
- 產地 國產
- 廠商性質 經銷商
- 更新時間 2023/3/20 20:16:36
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應用領域 | 化工,生物產業(yè) |
|---|---|---|---|
| 主要用途 | 僅供科研研究實驗 | 英文名稱 | Recombinant Coenzyme Q10 Homolog B (COQ10B) |
| 物種 | Homo sapiens (Human,，人) | 規(guī)格 | 10μg50μg200μg1mg5mg |
| 品牌 | 研生 |
商品介紹：
Coenzyme Q-binding protein COQ10 homolog B, mitochondrial 酶與激酶 物種：Homo sapiens (Human，人) 來源：原核表達 宿主E.coli 內毒素水平：<1.0EU/μg(LAL法測定) 亞細胞定位：：n/a 預測分子量：53.2kDa 實際分子量：53.2kDa(差異分析請參閱說明書) 片段與標簽：Ala38~Thr238 with N-terminal His and GST Tag 緩沖液成份：磷酸鹽緩沖液（pH7.4,，含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.） 性狀：凍干粉 純度：> 90% 等電點：- 應用：Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB. 規(guī)格10μg50μg200μg1mg5mg |
公司產品僅供科研使用,，不得用于臨床！
產品名稱 | 英文名稱 | 物種 |
輔酶Q10同源物B(COQ10B)重組蛋白 | Recombinant Coenzyme Q10 Homolog B (COQ10B) | Homo sapiens (Human,，人) |
蛋白表達及純化：
1.培養(yǎng)500ml哺乳動物細胞,，然后將重組質粒轉染到細胞中，通過瞬時表達產生目標蛋白,。
2.收集含有目標蛋白的部分（細胞或培養(yǎng)上清）,。
3.通過親和，離子交換,，疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達的重組蛋白,。
4.通過SDS-PAGE電泳檢測每步結果并控制最終產品質量。
5.通過Western-blot驗證目標蛋白正確性,。
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操作步驟：
Ⅰ 實體組織蛋白的提取
1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑,， 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF，混勻,。冰上保存數(shù)分鐘待用,。
2． 每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中，剪碎成3mm×3mm左右的小塊,，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer,，玻璃勻漿器上下手動勻漿15次，注意低溫操作,；
3． 取組織勻漿液轉移到1.5mL預冷的離心管,，離心10000轉/分，4℃離心5 min,；
4． 取上清轉移至新的預冷的離心管中,，即為全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法,、BCA法）,；
5． 分裝保存于-70℃,避免反復凍融。
Ⅱ 培養(yǎng)細胞蛋白提取
1． 貼壁培養(yǎng)的細胞,，吸去培養(yǎng)基后,，加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次，每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液,；
2． 懸浮培養(yǎng)的細胞或用細胞刮子刮下的貼壁細胞,，將細胞及培養(yǎng)液移至離心管中,， 1000轉/分離心10 min，再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS,，1000轉/分離心5 min洗兩次,；
3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑， 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF,，混勻,。冰上保存數(shù)分鐘待用。
4． 細胞洗滌后,，轉至新的預冷的離心管中,，加入上述配制好的冷Lysis Buffer，加入量如下表所示：
細胞數(shù)量 | Lysis Buffer加入量 |
107個 | 0.5 mL～1 mL |
5×106個 | 0.2 mL～0.5 mL |
5．置于4℃搖床平臺上,，溫和振蕩15 min,；
6． 14,000rpm，4℃離心15min,，取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法,、BCA法）；
7． 分裝保存于-70℃,避免反復凍融,。
IFNA4產品名稱: 干擾素α4抗體交叉反應: Human, Mouse
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注意事項：
1、不同細胞或組織樣品所需的固定時間有所不同,，應當根據細胞或組織的種類以及組織塊的大小來調整固定時間,。
2、雖然作用溫和,，但能硬化組織,，固定時間過久會導致組織變脆，切片時易碎,。因此固定時間通常不宜超過 24 小時,。
3、醛基與抗原蛋白的氨基交聯(lián)形成羧甲基,，使抗原決定簇的三維構象出現(xiàn)空間障礙,。分子間交聯(lián)形成的網格結構可能部分或 掩蓋某些抗原決定簇,，使之不能充分暴露,，可造成假陰性的染色，影響免疫組化結果,。因此,，4%固定的細胞或組織樣品在進行免疫組化檢測時，有時需要對抗原先進行修復,，然后才能進行免疫染色等后續(xù)操作,。
4,、本產品對人體有害，操作時請小心,，并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內,。
5、為了您的安全和健康,，請穿實驗服并戴一次性手套操作
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