化工儀器網(wǎng)>產(chǎn)品展廳>技術(shù)服務(wù)>分子生物學(xué)服務(wù)>RNAi全套服務(wù)> m5C甲基化測(cè)序-mRNA +lncRNA（lncRNA-BS）
m5C甲基化測(cè)序-mRNA +lncRNA（lncRNA-BS）
- 公司名稱 深圳市易基因科技有限公司
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- 型號(hào)
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時(shí)間 2023/3/3 16:49:57
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大家好,，這是專注表觀組學(xué)十余年,。
m5C是RNA百余種修飾中研究較多的一種。m5C存在于tRNA上時(shí),，可以對(duì)翻譯進(jìn)行調(diào)節(jié),；存在于rRNA上時(shí)，可以對(duì)核糖體的生物合成進(jìn)行質(zhì)控,；存在于mRNA上時(shí),，則可以影響mRNA的結(jié)構(gòu)、穩(wěn)定性及翻譯過程,。
易基因提供適用于不同科研需求的m5C甲基化測(cè)序技術(shù)：
常規(guī)mRNA m5C甲基化測(cè)序（RNA-BS）：
mRNA分離后首先通過亞硫酸鹽處理,，非甲基化的C轉(zhuǎn)變?yōu)閁，m5C修飾的堿基保持不變,，結(jié)合高通量測(cè)序,，可以對(duì)RNA上的每一個(gè)C堿基修飾進(jìn)行定位與定量。
常規(guī)mRNA +lncRNA m5C甲基化測(cè)序（全轉(zhuǎn)錄組RNA-BS）：
易基因科技建立的升級(jí)版m5C RNA甲基化測(cè)序服務(wù),，去除人rRNA后,，剩余RNA經(jīng)重亞硫酸鹽處理后，結(jié)合高通量NGS策略,，可在全轉(zhuǎn)錄組范圍內(nèi)單堿基分辨率地檢測(cè)基因m5C甲基化修飾分布。
研究方向：
與m6A甲基化類似,，m5C甲基化已被證明與腫瘤,、神經(jīng)系統(tǒng)紊亂,、代謝性疾病、病毒感染以及個(gè)體發(fā)育等密切相關(guān),。
此外,，RNA甲基化（m5C）與人類疾病密切相關(guān)，其功能涉及調(diào)控干細(xì)胞應(yīng)激,、細(xì)胞毒性應(yīng)激,、mRNA出核和植物細(xì)胞發(fā)育及基因表達(dá)等方面。
技術(shù)優(yōu)勢(shì)：
高深度：超高深度重亞硫酸鹽處理,，檢測(cè)準(zhǔn)確性高,；
高通量：結(jié)合高通量NGS，全轉(zhuǎn)錄組范圍內(nèi)檢測(cè),；
單堿基：單堿基分辨率,，快速檢測(cè)和分析RNA中的m5C。
高準(zhǔn)確：精確的檢測(cè)mRNA等每一個(gè)C堿基的的修飾水平,。
技術(shù)路線：
實(shí)驗(yàn)策略：
分析內(nèi)容：
送樣要求：
經(jīng)典案例：
一,、斑馬魚：m5C修飾在生理和病理進(jìn)程中的重要調(diào)控作用
2019年8月，在Molecular Cell（17.97）發(fā)表的RNA 5-methylcytosine facilitates maternal-to-zygotic transition through preventing maternal mRNA decay文獻(xiàn),，研究了5-甲基胞嘧啶（m5C）如何參與調(diào)控母源mRNA穩(wěn)定性維持,，發(fā)現(xiàn)m5C通過新結(jié)合蛋白Ybx1調(diào)控母源mRNA的穩(wěn)定性，進(jìn)而調(diào)控斑馬魚母源-合子轉(zhuǎn)換（maternal-to-zygotic transition, MZT）及早期胚胎發(fā)育進(jìn)程,。通過繪制斑馬魚早期胚胎發(fā)育過程中RNA m5C甲基化圖譜,，發(fā)現(xiàn)在母源-合子轉(zhuǎn)換過程中，m5C修飾的母源mRNA比未修飾的mRNA更穩(wěn)定,。研究結(jié)果揭示：m5C修飾通過其結(jié)合蛋白Ybx1招募Pabpc1a維持母源mRNA穩(wěn)定性從而保證母源-合子轉(zhuǎn)換有序機(jī)制的發(fā)現(xiàn),，進(jìn)一步證明其在調(diào)控重要生理和病理進(jìn)程中的重要作用。
二,、腫瘤：?jiǎn)螇A基分辨率下分析人類膀胱尿路上皮癌(UCB)樣本中mRNA的m5C修飾
2019年,，發(fā)表在Nature Cell Biology（IF: 28.824）上的5-methylcytosine promotes pathogenesis of bladder cancer through stabilizing mRNAs的文章，通過單堿基分辨,，分析人類膀胱尿路上皮癌(UCB)樣本中mRNA的5甲基化胞嘧啶（m5C）修飾,，鑒定出大量的癌基因mRNA攜帶高甲基化m5C修飾位點(diǎn)，并且高甲基化修飾基因在UCB樣本中呈現(xiàn)高表達(dá),。此外證明,，YBX1可以特異性的識(shí)別m5C位點(diǎn)（Reader），YBX1通過募集ELAVL1蛋白維持靶向mRNA的穩(wěn)定性,。此外發(fā)現(xiàn),，NSUN2和YBX1通過結(jié)合HDGF基因3’端非編碼區(qū)域的m5C位點(diǎn)驅(qū)動(dòng)UCB的發(fā)病機(jī)制。本文揭示了m5C mRNA修飾對(duì)癌基因激活調(diào)控的新機(jī)制，也為不同腫瘤研究提供了新思路和潛在的治療策略,。
在豬糞便樣本噬菌體和原噬菌體重疊群中發(fā)現(xiàn)的ARGs
三,、哺乳動(dòng)物：m5C修飾在mRNA出核和轉(zhuǎn)錄后調(diào)控中發(fā)揮重要作用
2017年，發(fā)表在Cell Research（IF: 25.617） 上,，題為5-methylcytosine promotes mRNA export — NSUN2 as the methyltransferase and ALYREF as an m5C reader的研究發(fā)現(xiàn),，m5C修飾在富含CG的區(qū)域和翻譯起始位點(diǎn)下游的區(qū)域富集，在哺乳動(dòng)物轉(zhuǎn)錄組中具有保守的,、組織特異性的和動(dòng)態(tài)的特征,。此外，mRNA中m5C的形成主要是由RNA甲基轉(zhuǎn)移酶NSUN2催化的,，且m5C在體內(nèi)是由mRNA運(yùn)輸因子ALYREF特異性識(shí)別,。NSUN2調(diào)節(jié)ALYREF的核-質(zhì)穿梭、RNA結(jié)合親和力和相關(guān)mRNA的出核,。該研究提供了哺乳動(dòng)物轉(zhuǎn)錄組的m5C的全面概況,，并表明m5C修飾在mRNAc出核和轉(zhuǎn)錄后調(diào)控中發(fā)揮重要作用。
四,、人細(xì)胞：重亞硫酸鹽處理結(jié)合高通量NGS策略,，單堿基分辨率檢測(cè)(h)m5C修飾分布
2021年，發(fā)表在RNA Biology（IF: 4.652）上,，題為Bisulphite miRNA-seq reveals widespread CpG and non-CpG 5-(hydroxy)methyl-Cytosine in human microRNAs文章,，通過重亞硫酸鹽處理結(jié)合高通量NGS策略，以單核苷酸分辨率系統(tǒng)地分析miRNAs中的(h)m5C,，即BS-miRNA-seq,，單核苷酸分辨率系統(tǒng)地檢測(cè)了人類細(xì)胞系和人外周血單核細(xì)胞(PBMC)中miRNAs上的(h)m5C修飾，并通過開發(fā)的專用的分析流程(MAmBA)分析了樣本中的(h)m5C甲基化圖譜,，發(fā)現(xiàn)(h)m5C是人miRNAs中廣泛存在的修飾,，并不局限于CG序列，并且通過m5C和hm5C的抗體免疫沉淀驗(yàn)證了實(shí)驗(yàn)結(jié)果,，也表明了人類miRNA包含hm5C修飾,。
參考文獻(xiàn)：
①Yang Y, et al.RNA 5-Methylcytosine Facilitates the Maternal-to-Zygotic Transition by Preventing Maternal mRNA Decay. Mol Cell. 2019 Sep 19;75(6):1188-1202.e11.
②Chen X, et al.5-methylcytosine promotes pathogenesis of bladder cancer through stabilizing mRNAs. Nat Cell Biol. 2019 Aug;21(8):978-990.
③Yang X, et al.5-methylcytosine promotes mRNA export - NSUN2 as the methyltransferase and ALYREF as an m5C reader. Cell Res. 2017 May;27(5):606-625.
④Carissimi C, et al.Bisulphite miRNA-seq reveals widespread CpG and non-CpG 5-(hydroxy)methyl-Cytosine in human microRNAs. RNA Biol. 2021 Dec;18(12):2226-2235.
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