防止RNA酶污染的方法

來(lái)源：天津益元利康生物科技有限公司 2024年05月10日 14:33

　　在所有RNA實(shí)驗(yàn)中，最關(guān)鍵的因素是分離得到全長(zhǎng)的RNA。而實(shí)驗(yàn)失敗的主要原因是核糖核酸酶(RNA酶)的污染。由于RNA酶廣泛存在而穩(wěn)定，一般反應(yīng)不需要輔助因子,。因而RNA制劑中只要存在少量的RNA酶就會(huì)引起RNA在制備與分析過(guò)程中的降解，而所制備的RNA的純度和完整性又可直接影響RNA分析的結(jié)果,，所以RNA的制備與分析操作難度極大,。那么你知道防止RNA酶污染的方法有什么嗎？讓我們一起來(lái)看看吧,！

　　防止RNA酶污染的措施

　　1. 所有的玻璃器皿均應(yīng)在使用前于180℃的高溫下干烤6hr或更長(zhǎng)時(shí)間,。

　　2. 塑料器皿可用0.1% DEPC水浸泡或用氯仿沖洗(注意：有機(jī)玻璃器具因可被氯仿腐蝕，故不能使用),。

　　3. 有機(jī)玻璃的電泳槽等,，可先用去污劑洗滌，雙蒸水沖洗,，乙醇干燥,，再浸泡在3% H2O2 室溫10min，然后用0.1% DEPC水沖洗,，晾干,。

　　4. 配制的溶液應(yīng)盡可能的用0.1% DEPC，在37℃處理12hr以上,。然后用高壓滅菌除去殘留的DEPC,。不能高壓滅菌的試劑，應(yīng)當(dāng)用DEPC處理過(guò)的無(wú)菌雙蒸水配制,，然后經(jīng)0.22μm濾膜過(guò)濾除菌,。

　　RNA酶抑制劑

　　1. 焦磷酸二乙酯(DEPC)：是一種強(qiáng)烈但不徹底的RNA酶抑制劑。它通過(guò)和RNA酶的活性基團(tuán)組氨酸的咪唑環(huán)結(jié)合使蛋白質(zhì)變性,，從而抑制酶的活性,。

　　2. 異硫氰酸胍：目前被認(rèn)為是有效的RNA酶抑制劑，它在裂解組織的同時(shí)也使RNA酶失活,。它既可破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)使核酸從核蛋白中解離出來(lái)，又對(duì)RNA酶有強(qiáng)烈的變性作用,。

　　3. 氧釩核糖核苷復(fù)合物：由氧化釩離子和核苷形成的復(fù)合物,，它和RNA酶結(jié)合形成過(guò)渡態(tài)類物質(zhì),，幾乎能完全抑制RNA酶的活性。

　　4. RNA酶的蛋白抑制劑(RNasin)：從大鼠肝或人胎盤中提取得來(lái)的酸性糖蛋白,。RNasin是RNA酶的一種非競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑,，可以和多種RNA酶結(jié)合，使其失活,。

　　5. 其它：SDS,、尿素、硅藻土等對(duì)RNA酶也有一定抑制作用,。

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