小鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞需要準(zhǔn)備好細(xì)胞所要用到的培養(yǎng)基和相關(guān)試劑,，雖然所有的貼壁,，半貼壁或者懸浮細(xì)胞處理方式差不多，但是不同的實驗室培養(yǎng)條件和處理力度還有試劑的批間差這些問題存在,，也會導(dǎo)致對細(xì)胞處理不當(dāng),，  或者環(huán)境的不適應(yīng)而造成細(xì)胞的死亡。
小鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)物的生理環(huán)境不同時定義為其物理化學(xué)環(huán)境中,，更好地理解血清的組件,，所必需的增殖的生長因子的鑒定，并更好地理解細(xì)胞在培養(yǎng)的微環(huán)境（即,，細(xì)胞 - 細(xì)胞相互作用,，氣體的擴散,，與基質(zhì)相互作用）現(xiàn)在允許在無血清培養(yǎng)基中某些細(xì)胞系的培養(yǎng)。
小鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)物的主要優(yōu)點是操縱物理化學(xué)（即,，溫度,，pH，滲透壓,，O2和CO2張力）和生理環(huán)境（即,，激素和營養(yǎng)物濃度），其中所述細(xì)胞繁殖的能力,。除溫度,，將培養(yǎng)環(huán)境是由生長培養(yǎng)基進(jìn)行控制。
小鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞對于培養(yǎng),，只要我們細(xì)心操作,，注意細(xì)節(jié)，并不是大家說的那樣困難,。對于有經(jīng)驗和有條件的客戶,，建議由公司代為培養(yǎng)細(xì)胞及進(jìn)行后續(xù)研究。

細(xì)胞復(fù)蘇技術(shù)：

1. 取出細(xì)胞,，迅速放入37℃溫水中快速解凍

2. 吸出細(xì)胞懸液,并加10倍以上培養(yǎng)液

3. 1000r/分鐘離心5分鐘,，去除上清

4. 用培養(yǎng)液適當(dāng)稀釋后接種培養(yǎng)瓶,放入37℃ CO2培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)

5. 鏡檢細(xì)胞貼壁能力，次日更換一次培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng)

培養(yǎng)方法：

收到細(xì)胞后,，在倒置顯微鏡下觀察整個細(xì)胞生長情況：

如果細(xì)胞未長滿,，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作,，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶,，留10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。

如果細(xì)胞已長滿（達(dá)80-90%）,。即可進(jìn)行傳代,，具體步驟如下：

a，棄去培養(yǎng)液,，用PBS洗1-2次,。

b，向瓶內(nèi)加入1.0-2.0ml酶液,，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓，迅速拿回操作臺,，吸取酶,，加含有6ml 含10%血清的培養(yǎng)液，輕輕吹打細(xì)胞。

c,，加入等量的的培養(yǎng)液,，輕輕吹打混勻后吸出一半，分到新的培養(yǎng)

d,，傳代比例：1:2-1:3

小鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞

保存和應(yīng)用：

客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞,，如是新鮮原代細(xì)胞，客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,，再進(jìn)行后續(xù)的實驗操作,。如是凍存細(xì)胞，客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮,、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇,。

細(xì)胞復(fù)蘇的原則：

在實際操作中，凍存細(xì)胞要進(jìn)行復(fù)蘇,，再培養(yǎng)傳代,。復(fù)蘇細(xì)胞一般采用快速融化法。以保證細(xì)胞外結(jié)晶快速融化,，以避免慢速融化水分滲入細(xì)胞內(nèi),，再次形成胞內(nèi)結(jié)晶損傷細(xì)胞。

1）該細(xì)胞只能用于科研,，不得用于臨床,。

2）收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液,、渾濁等現(xiàn)象,，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

3）仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書,，了解細(xì)胞相關(guān)信息,，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基,、血清比例,、所需細(xì)胞因子等。

4）用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面,，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài),。因運輸問題貼壁細(xì)胞會有少量從瓶壁脫落，將細(xì)胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)過夜,，隔天再取出觀察,。此時多數(shù)細(xì)胞均會貼壁,，若細(xì)胞仍不能貼壁請用臺盼藍(lán)染色測定細(xì)胞活力,，如果證實細(xì)胞活力正常，請將細(xì)胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng)；如果染色結(jié)果顯示細(xì)胞無活力,，請拍下照片及時和我們聯(lián)系,，信息確認(rèn)后我們?yōu)槟倜赓M寄送一次。

5）請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng),。培養(yǎng)瓶內(nèi)多余的培養(yǎng)基可收集備用,，細(xì)胞傳代時可以一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合，使細(xì)胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件;建議直接購買我司提供的培養(yǎng)基,。

6）建議客戶收到細(xì)胞后qian3天各拍幾張細(xì)胞照片,，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流,。

細(xì)胞培養(yǎng)操作

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min,，棄去上清液,，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中,，加入約8 mL培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

a,、棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次,。

b,、加1 mL消化液培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細(xì)胞,，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2 min（視細(xì)胞情況而定）,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中,，1000 rpm離心5 min,，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻,。

c,、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。下面 T25 瓶為例；

a,、收集細(xì)胞,，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min,，棄去上清液,，用PBS清洗一遍，棄盡PBS,，進(jìn)行細(xì)胞計數(shù),。

b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液,，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL,，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液,，注意凍存管做好標(biāo)識,。

c、將凍存管放入-80℃冰箱,，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取。

深圳瑞清生物信息科技有限公司經(jīng)過數(shù)年的努力發(fā)展已迅速成為集產(chǎn)品研發(fā),、經(jīng)營為一體的專業(yè)化生物工程公司,。公司具有完善的實驗技術(shù)開發(fā)平臺，成熟的抗原,、抗體研發(fā)系統(tǒng),，熟練掌握各種酶聯(lián)技術(shù)，結(jié)合公司的研發(fā)團(tuán)隊,，可以有效的保證公司產(chǎn)品強的穩(wěn)定性和高的準(zhǔn)確性,，同時又具有競爭力的價格。 公司主營ELISA試劑盒,，目前可以提供生化試劑,、分子生物學(xué)試劑及試劑盒，各種抗體及免疫學(xué)試劑盒,、實驗耗材等多門類上萬種產(chǎn)品,，產(chǎn)品涉及分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué),、免疫學(xué)等生命科學(xué)的各個領(lǐng)域,。