50T 牛結(jié)核分支桿菌檢測(cè)試劑盒
參考價(jià) | ¥ 2980 | ¥ 2500 | ¥ 2300 |
訂貨量 | 1-4盒 | 5-7盒 | ≥8盒 |
- 公司名稱 上海臻科生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號(hào) 50T
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時(shí)間 2025/7/1 16:10:40
- 訪問次數(shù) 1818
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
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【產(chǎn)品名稱】
通用名稱:牛結(jié)核分支桿菌檢測(cè)試劑盒(實(shí)時(shí)熒光PCR法)
英文名稱:Mycobacterium bovis Detection Kit (Real-Time PCR Method)
【包裝規(guī)格】 25T /盒 & 50T /盒
【預(yù)期用途】
牛結(jié)核分支桿菌檢測(cè)試劑盒適用于牛結(jié)核分枝桿菌檢測(cè),,對(duì)牛結(jié)核分枝桿菌引起的傳染病及其并發(fā)癥的診斷及療效評(píng)估有重要指導(dǎo)意義,。
【檢驗(yàn)原理】
?針對(duì)M. bovis高度保守區(qū)域設(shè)計(jì)特異性引物和探針,,在反應(yīng)體系中含M. bovis基因組模板的情況下,PCR反應(yīng)得以進(jìn)行并釋放熒光信號(hào),。利用儀器對(duì)PCR過(guò)程中相應(yīng)通道的信號(hào)強(qiáng)度進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)和輸出,,實(shí)現(xiàn)檢測(cè)結(jié)果的定性分析。
【主要組成成份】
序號(hào) | 組成 | 25T/盒 | 50T/盒 |
1 | PPRV RT-PCR反應(yīng)液 | 437.5 μL×1管 | 875 μL×1管 |
2 | PPRV 混合酶液 | 62.5 μL×1管 | 125 μL×1管 |
3 | PPRV 陽(yáng)性對(duì)照 | 40 μL×1管 | 40 μL×1管 |
4 | PPRV 陰性對(duì)照 | 40 μL×1管 | 40 μL×1管 |
5 | 說(shuō)明書 | 1份 | 1份 |
注:陰性對(duì)照為?;蚪MDNA,,陽(yáng)性對(duì)照為M. bovis經(jīng)滅活處理的核酸提取物。
【儲(chǔ)存條件及有效期】避光-20℃以下保存,,避免反復(fù)凍融,,有效期12個(gè)月。
【適用儀器】ABI 系列,、Bio-Rad系列,、Agilent Stratagene MX系列、Roche LightCycler R480,、Cepheid SmartCycler,、Rotor-Gene系列、杭州博日系列等多通道實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀,。
【樣本要求】
1. 菌落,、菌苔等應(yīng)為新鮮采集并使用雙蒸滅菌水或滅菌生理鹽水懸浮的原始標(biāo)本。腹胸水,、支氣管肺泡灌洗液,、尿液、腦脊液等無(wú)菌收集數(shù)毫升,。血液新鮮采集,,肝素抗凝。痰液中加入等體積的1mol/L NaOH溶液混勻,,室溫液化30min,。
2. 標(biāo)本收集后若不能立即檢測(cè),可置于2~8℃冷藏過(guò)夜保存,;如需長(zhǎng)期保存,標(biāo)本應(yīng)凍存于-20℃~-80℃,。
3. 標(biāo)本保存期間應(yīng)避免反復(fù)凍融,。
【檢驗(yàn)方法】
1. 試劑準(zhǔn)備(試劑準(zhǔn)備區(qū))
(1)從冰箱中取出試劑盒, 從試劑盒中取出實(shí)驗(yàn)所需試劑,充分融化混勻并瞬時(shí)離心以去除管壁附著液體,。
(2)核算當(dāng)次實(shí)驗(yàn)所需要的反應(yīng)數(shù)(n),,并根據(jù)如下表所示反應(yīng)體系計(jì)算當(dāng)次實(shí)驗(yàn)所需要的各種試劑量。
n =陰性對(duì)照數(shù)(1T)+陽(yáng)性對(duì)照數(shù)(1T)+誤差預(yù)留量(1T)+樣本數(shù)
單反液配制表 | RT-PCR反應(yīng)液 | 17.5 μL |
混合酶液 | 2.5 μL |
(3)在無(wú)菌離心管中加入上述試劑,,充分混勻后瞬時(shí)離心,。按照20 μL/管分裝量將試劑分裝至PCR反應(yīng)管,。
(4)蓋緊PCR反應(yīng)管蓋后將PCR反應(yīng)管轉(zhuǎn)移至樣本處理區(qū)。剩余試劑放回-20℃以下冰箱冷凍保存,。
2.樣本準(zhǔn)備(樣本處理區(qū))
用QIAGEN,、Roche公司提取試劑盒提取DNA,具體操作按照其試劑盒說(shuō)明書操作,。
3.加樣
在上述制備好的PCR反應(yīng)樣本管中分別加入處理好的待測(cè)標(biāo)本DNA各5μl,、終體積25μl/管,蓋好PCR反應(yīng)蓋混勻后瞬時(shí)低速離心,,轉(zhuǎn)移到PCR儀器上,。陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照管則各加5μL試劑盒自帶的陰性對(duì)照或陽(yáng)性對(duì)照品,終體積為25μl/管,,蓋好PCR反應(yīng)蓋混勻后瞬時(shí)低速離心,,轉(zhuǎn)移到PCR儀器上。
4.PCR(PCR擴(kuò)增區(qū))
(1)取樣本處理區(qū)準(zhǔn)備好的PCR反應(yīng)管,,放置在實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀樣品槽相應(yīng)位置,,并記錄放置順序。
(2)按下表設(shè)置儀器核酸擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)進(jìn)行PCR擴(kuò)增,。
反應(yīng)體積 | 25 μL | 通道選擇 | FAM通道采集布魯氏菌熒光信號(hào) |
PCR | 步驟 | 條件 | 循環(huán)數(shù) |
反應(yīng) | UNG處理 | 50℃:2分鐘(min) | 1 |
條件 | 預(yù)變性 | 95℃:3分鐘(min) | 1 |
預(yù)擴(kuò)增 | 95℃:5秒(s) | 5 | |
55℃:40秒(s) | |||
PCR擴(kuò)增 | 95℃:5秒(s) | 40 | |
55℃:40秒(s) | |||
(此階段結(jié)束時(shí)采集熒光信號(hào)) |
注:ABI系列熒光PCR儀在設(shè)置時(shí)不選ROX校正,,設(shè)置淬滅基團(tuán)選擇None。
【參考值(參考范圍)】
1.試劑盒有效性判定:
(1)陽(yáng)性對(duì)照:有典型S型擴(kuò)增曲線或Ct值≤35,。
(2)陰性對(duì)照:Ct值>38或無(wú)Ct值,,線形為直線或輕微斜線,無(wú)指數(shù)增長(zhǎng)期,。
2.標(biāo)本結(jié)果判定:
(1)陽(yáng)性:標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果Ct值≤35或有明顯指數(shù)增長(zhǎng)期,。
(2)可疑:標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果Ct值在35~38范圍內(nèi)。此時(shí)應(yīng)對(duì)標(biāo)本進(jìn)行重復(fù)檢測(cè),,如重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果Ct值仍在35~38范圍內(nèi),,有明顯指數(shù)增長(zhǎng)期,則判定為陽(yáng)性,,否則為陰性,。
(3)陰性:標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果Ct值>38或無(wú)Ct值。
【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】
通道及檢測(cè)結(jié)果 | 標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果解釋 |
FAM | |
陰性(-) | 標(biāo)本中未檢出布魯氏菌 |
陽(yáng)性(+) | 標(biāo)本中檢測(cè)出布魯氏菌 |
【檢驗(yàn)方法的局限性】
1. 當(dāng)檢測(cè)樣本中被檢核酸濃度含量低于本試劑盒的ZD檢出限可能會(huì)發(fā)生假陰性的結(jié)果,。
2. 本試劑盒僅供標(biāo)本初步篩查使用,,對(duì)于本試劑盒檢測(cè)陽(yáng)性結(jié)果應(yīng)進(jìn)一步使用培養(yǎng)法進(jìn)行確診。
【產(chǎn)品性能指標(biāo)】 產(chǎn)品的ZD檢出限為102CFU,,產(chǎn)品CV值≤5%,。
【注意事項(xiàng)】
1. 整個(gè)檢測(cè)過(guò)程應(yīng)嚴(yán)格按照本說(shuō)明書要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作,,各區(qū)實(shí)驗(yàn)服,、儀器,、耗材應(yīng)獨(dú)立使用,不能混用,;實(shí)驗(yàn)用吸頭采用帶濾芯吸頭,;樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜,樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作,;三個(gè)區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置,。
2. 每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)該設(shè)置陰、陽(yáng)性對(duì)照,。
3. 為保證試劑不受標(biāo)本污染,,必須將混合酶液及PCR反應(yīng)液保存于試劑準(zhǔn)備區(qū)。
4. 試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻,,并應(yīng)瞬時(shí)離心,。
5. 試劑盒內(nèi)所配陰性和陽(yáng)性對(duì)照在第一次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū),并單獨(dú)存放,。
6. 為防止熒光干擾,,應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管,并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記,。
7. 儀器擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說(shuō)明書相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置,;不同批號(hào)試劑不能混用。
8. ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正,,淬滅基因選擇None,。
9. 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無(wú)害化處理后方可丟棄。