服務(wù)簡(jiǎn)介

細(xì)菌表達(dá)系統(tǒng)是一種比較理想的蛋白質(zhì)表達(dá)系統(tǒng)，它是生產(chǎn)重組蛋白和抗體的優(yōu)先選擇,，而且許多細(xì)菌已經(jīng)被很好地研究利用,。原核蛋白表達(dá)系統(tǒng)是常用的表達(dá)系統(tǒng)，在大量細(xì)菌中,，大腸桿菌和枯草芽孢桿菌細(xì)胞系是常用的重組蛋白表達(dá)宿主,，具有遺傳背景清楚、成本低、表達(dá)量高和表達(dá)產(chǎn)物分離純化相對(duì)簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn),。

大腸桿菌和枯草芽孢桿菌可以在適宜條件下以很低的成本快速復(fù)制,，而且表達(dá)水平高，這種特性使其成為大規(guī)模生產(chǎn)的有效和經(jīng)濟(jì)的方式,。此外,，他們的基因組已*測(cè)序。另外,，由于結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單,，細(xì)菌比真核生物更容易轉(zhuǎn)染。這些優(yōu)勢(shì)特征使表達(dá)過程更容易和更快速,。

但在某些方面,，原核蛋白表達(dá)系統(tǒng)也有其局限性。雖然,，可以利用細(xì)菌比較容易地表達(dá)具有少量修飾的蛋白質(zhì),，但需要考慮到細(xì)菌中沒有細(xì)胞核，高爾基體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng),。而這些結(jié)構(gòu)在細(xì)胞運(yùn)輸和翻譯后修飾（PTM）過程中是必需的,。因此，細(xì)菌表達(dá)系統(tǒng)不能表達(dá)膜結(jié)合蛋白,，例如胰島素受體,、血型糖蛋白以及某些酶等。由于很多蛋白質(zhì)在正確折疊中需要這種修飾,，而細(xì)菌無法完成修飾,，導(dǎo)致細(xì)菌中產(chǎn)生的很多蛋白質(zhì)是無活性的并且不起作用。由此看來,，客戶必須根據(jù)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能特性選擇合適的蛋白表達(dá)系統(tǒng),。

服務(wù)內(nèi)容 

百歐泰生物具有多種表達(dá)宿主菌，客戶可以根據(jù)實(shí)際需要,，選用不同融合標(biāo)簽蛋白,、不同抗性、不同作用元件的表達(dá)載體和不同性質(zhì)的表達(dá)宿主,。本公司可提供的服務(wù)包括以下幾類,，客戶可以提供目的基因序列或建好的表達(dá)質(zhì)粒，本公司提供一站式基因合成和蛋白表達(dá)與純化服務(wù)或重組蛋白表達(dá)與純化服務(wù),。

實(shí)驗(yàn)原理

在原核蛋白表達(dá)體系中,，外源基因通常需要誘導(dǎo)劑的誘導(dǎo)才能進(jìn)行表達(dá)，以E.coli（大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)）為例,，使用誘導(dǎo)劑IPTG誘導(dǎo)表達(dá)原理如下：

原核生物絕大多數(shù)的基因按功能相關(guān)性成簇地排列,，且密集于染色體上,，共同形成一個(gè)轉(zhuǎn)錄單位——操縱子，也稱基因表達(dá)的協(xié)同單位,。E.coli的乳糖操縱子含Z,、Y、A三個(gè)結(jié)構(gòu)基因,，分別編碼β-半乳糖苷酶（β-galactosidase）,、通透酶（permease）和乙酰基轉(zhuǎn)移酶（transacetylase),；此外還有調(diào)控基因：操縱序列O（operator）、啟動(dòng)+序列P（promoter）,；而I(編碼Lac阻遏物,，Lac repressor)不屬于乳糖操縱子。

Lac阻遏物是一種具有4個(gè)相同亞基的四級(jí)結(jié)構(gòu)蛋白,，都有一個(gè)與誘導(dǎo)劑結(jié)合的位點(diǎn),。在沒有乳糖存在時(shí)，lac操縱子（元）處于阻遏狀態(tài),，Lac阻遏物（即阻遏蛋白）能與操縱基因O結(jié)合,，阻礙RNA聚合酶與P序列結(jié)合，阻止了轉(zhuǎn)錄的路徑,，從而抑制轉(zhuǎn)錄啟動(dòng),。而當(dāng)有誘導(dǎo)劑（這里指IPTG）存在時(shí)，誘導(dǎo)劑可與阻遏蛋白結(jié)合,，使阻遏蛋白構(gòu)象發(fā)生變化,，導(dǎo)致阻遏物從操縱基因O上解離下來，RNA聚合酶不再受阻礙,，啟動(dòng)子P開始發(fā)生轉(zhuǎn)錄,，啟動(dòng)反應(yīng)開始發(fā)生轉(zhuǎn)錄。

在這個(gè)操縱子（元）體系中,，真正的誘導(dǎo)劑并非乳糖本身,。乳糖進(jìn)入細(xì)胞，經(jīng)β-半乳糖苷酶催化,，轉(zhuǎn)變?yōu)榘肴樘恰瓷砩系恼T導(dǎo)劑,。而在實(shí)驗(yàn)中，通常選用異丙基硫代半乳糖苷（IPTG）作為誘導(dǎo)劑,，IPTG是一種作用很強(qiáng)的誘導(dǎo)劑,，不被細(xì)菌代謝且十分穩(wěn)定，因此實(shí)驗(yàn)室使用較多,。

實(shí)驗(yàn)步驟

測(cè)序驗(yàn)證

序列比對(duì)

重組質(zhì)粒酶切

蛋白表達(dá)分析鑒定（11度低溫誘導(dǎo)體系）

重組蛋白親和純化（Ni親和樹脂一步親和純化）

純化后蛋白Sumo蛋白酶酶切

Sumo蛋白酶酶切后第二次親和純化

得到酶切后目的蛋白

實(shí)驗(yàn)服務(wù)流程

雙方溝通一致后確定實(shí)驗(yàn)方案,，確定服務(wù)要求-簽訂合同—預(yù)付款-開始實(shí)驗(yàn)-成果交付

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