流式細(xì)胞分選技術(shù)實(shí)驗(yàn)服務(wù)

一.服務(wù)介紹

流式細(xì)胞分選技術(shù)是利用流式細(xì)胞分選儀,。以高能量激光照射高速流動(dòng)狀態(tài)下被熒光色素染色的單細(xì)胞或微粒，測(cè)量其產(chǎn)生的散射光和發(fā)射熒光的強(qiáng)度,，從而對(duì)細(xì)胞(或微粒)的物理,、生理、生化,、免疫,、遺傳、分子生物學(xué)性狀及功能狀態(tài)等進(jìn)行定性或定量檢測(cè)的一種現(xiàn)代細(xì)胞分析技術(shù),，它可根據(jù)發(fā)射光的熒光強(qiáng)度和波長(zhǎng)將發(fā)光顆粒亞群分開(kāi)并可實(shí)現(xiàn)單克隆分選,，能復(fù)雜樣本中的細(xì)胞進(jìn)行鑒定、分類(lèi).定量和分離,，單次可同時(shí)對(duì)其中-種到四種特定細(xì)胞進(jìn)行超高速分選純化,、高通量單克隆分選或細(xì)胞芯片制備。分選后的細(xì)胞能直接用于培養(yǎng),、移植,、核酸提取、單細(xì)胞PCR擴(kuò)增或原位雜交等,，可進(jìn)一步進(jìn)行細(xì)胞基因,、蛋白、功能水平的研究和不同細(xì)胞之間的差異化研究,。硬件中樣本細(xì)胞丟棄的比例低于5%,，保證樣本中目標(biāo)細(xì)胞的高回收率。

二,、實(shí)驗(yàn)原理

當(dāng)經(jīng)熒光染色或標(biāo)記的單細(xì)胞懸液放入樣品管中,，被高壓壓入流動(dòng)室內(nèi)。流動(dòng)室內(nèi)充滿鞘液,在鞘液的包裹和推動(dòng)下,，細(xì)胞被排成單列，以-定速度從流動(dòng)室噴口噴出,。在流動(dòng)室的噴口上配有一個(gè)超高頻的壓電晶體,， 充電后振動(dòng)，使噴出的液流斷裂為均勻的液滴,，待測(cè)細(xì)胞就分散在這些液滴之中,。將這些液滴充以正、負(fù)不同的電荷,，當(dāng)液滴流經(jīng)過(guò)帶有幾千伏的偏轉(zhuǎn)板時(shí),，在高壓電場(chǎng)的作用下偏轉(zhuǎn)，落入各自的收集容器中,，沒(méi)有充電的液滴落入中間的廢液容器,，從而實(shí)現(xiàn)細(xì)胞的分離,。

三、實(shí)驗(yàn)流程(以分選有核紅細(xì)胞為例)

1采抗凝血10 ml,。

2.密度梯度分離單個(gè)核細(xì)胞層

(1)在短中管中加入適量淋巴細(xì)胞分離液,。

(2)取肝素抗凝靜脈血與等量Hank's液或RPM11640充分混勻，用滴管沿管壁緩慢疊加于分層液面上,注意保持清楚的界面,。水平離心2000 rpmx20分鐘,。

(3)離心后管內(nèi)分為三層，上層為血漿和Hank's液,， 下層主要為紅細(xì)胞和粒細(xì)胞,。中層為淋巴細(xì)胞分離液，在上,、中層界面處有一-以單個(gè)核細(xì)胞為主的白色云層狹窄帶,，單個(gè)核細(xì)胞包括淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞。此外,， 還含有血小板,。

(4)用毛細(xì)血管插到云霧層，吸取單個(gè)核細(xì)胞,。置入另-短中管中,加入5倍以上體積的Hank's液或RPMI1640, 1500rpmx10分鐘,，洗滌細(xì)胞兩次。

3.免疫熒光染色

將上一步得到的單個(gè)核細(xì)胞層按1x10/1的比例加入異硫青酸(FITC)標(biāo)記的CD71單克隆抗體(鼠IgM).孵育30 min后重懸于0.5 ml PBS液中進(jìn)行熒光染色,。

4.FACS分選CD71陽(yáng)性細(xì)胞,。

四、服務(wù)說(shuō)明

1.客戶提供血液樣本,。

2.公司提供圖片和分離后的細(xì)胞,。

3.實(shí)驗(yàn)周期為2周左右，具體根據(jù)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容而定,。

五,、質(zhì)量承諾

提供清晰的圖片和分選后的細(xì)胞。