細胞流式檢測服務(FACS)

細胞流式檢測是一種在液體系統(tǒng)中,，快速測定單個細胞或細胞器的生物,、物理和化學特性，并根據(jù)這些特性將所需要的細胞或細胞器進行定量分析和分選的技術,。它是一種可以快速,、準確的檢測細胞或者生物學顆粒的多種特性的技術，用來了解細胞群的均值和分布情況,，并還可以分選感興趣的細胞,、對該細胞做進一步的培養(yǎng)研究。

流式檢測服務項目：免疫表型分型,、表面抗原鑒定,、DNA含量檢測/細胞核型分析,、細胞周期檢測,、細胞凋亡檢測、細胞分選,、細胞內(nèi)鈣離子檢測,、線粒體膜電位檢測等。

細胞凋亡(apoptosis)是細胞的一種基本生物學現(xiàn)象，在多細胞生物去除不需要的或異常的細胞中起著必要的作用,。它在生物體的進化,、內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定以及多個系統(tǒng)的發(fā)育中起著重要的作用,。細胞凋亡不僅是一種特殊的細胞死亡類型，而且具有重要的生物學意義及復雜的分子生物學機制,。凋亡是多基因嚴格控制的過程,，這些基因在種屬之間非常保守，如Bcl-2家族,、caspase家族,、癌基因如C-myc、抑癌基因P53等,。而凋亡過程的紊亂可能與許多疾病的發(fā)生有直接或間接的關系,。如腫瘤、自身免疫性疾病等,，能夠誘發(fā)細胞凋亡的因素很多,，如射線、藥物等,。細胞發(fā)生凋亡時,，不同區(qū)域內(nèi)（如細胞膜、細胞漿,、線粒體,、細胞核等）會發(fā)生不同的生理生化改變。因此,，針對不同區(qū)域的細胞凋亡檢測要采用不同的方法,。

1）Annexin V 凋亡檢測

原理：Annexin Ⅴ是一種分子量為35-36kD的Ca依賴性磷脂結合蛋白，正常細胞中,，磷脂酰絲氨酸（phosphatidylserine, PS）只分布在細胞膜脂質(zhì)雙層的內(nèi)側,，細胞發(fā)生凋亡早期，膜磷脂酰絲氨酸（PS）由脂膜內(nèi)側翻向外側,。Annexin V作為一種磷脂結合蛋白,，與PS有高度親和力，它通過細胞外側暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細胞的胞膜結合,。因此Annexin V是檢測細胞早期凋亡的靈敏指標,。該方法通常結合流式細胞術一起使用。

2）線粒體膜電位分析（JC-1）

JC-1是一種廣泛用于檢測線粒體膜電位的理想熒光探針,?？梢詸z測細胞、組織或純化的線粒體膜電位,，線粒體膜電位的下降是細胞凋亡早期的一個標志性事件,。

原理：在線粒體膜電位較高時，JC-1聚集在線粒體的基質(zhì)（matrix）中,，形成聚合物（J-aggregates）,，可以產(chǎn)生紅色熒光（Ex/Em = 585/590）,；在線粒體膜電位較低時，JC-1不能聚集在線粒體的基質(zhì)中,，此時JC-1為單體（monomer）,，可以產(chǎn)生綠色熒光（Ex/Em = 510/527 nm）。這樣就可以非常方便地通過熒光顏色的轉變來檢測線粒體膜電位的變化,。

3）Caspase活性檢測

Caspase半胱氨酸蛋白酶家族引發(fā)的級聯(lián)反應是細胞凋亡過程的中心環(huán)節(jié),，其激活主要包括線粒體依賴途徑和死亡受體介導的信號轉導途徑。

原理：激活后的下游 Caspase,，通過切割特異性底物,，導致細胞凋亡。Caspase的活化是導致細胞凋亡的中心環(huán)節(jié),，細胞凋亡功能的抑制將導致腫瘤的發(fā)生及免疫功能的異常,，而細胞凋亡功能亢進與組織損傷和器官功能衰竭的發(fā)病密切相關。

4）TUNEL凋亡檢測

細胞凋亡中, 染色體DNA雙鏈斷裂或單鏈斷裂而產(chǎn)生大量的粘性3'-OH末端,，可在脫氧核糖核苷酸末端轉移酶(TdT)的作用下,，將脫氧尿苷三磷酸核苷酸(dUTP)和熒光素形成的衍生物標記到DNA的3'-末端,，從而可進行凋亡細胞的檢測,，稱為TUNEL法。由于正常的或正在增殖的細胞幾乎沒有DNA的斷裂,，因而沒有3'-OH形成,，很少能夠被染色。由此,，TUNEL是檢測DNA 片段化（細胞凋亡）的常用方法,。

細胞凋亡是生命的基本現(xiàn)象，是維持體內(nèi)細胞數(shù)量動態(tài)平衡的基本措施,。在胚胎發(fā)育階段通過細胞凋亡清除多余的和已完成使命的細胞,，保證了胚胎的正常發(fā)育；在成年階段通過細胞凋亡清除衰老和病變的細胞,，保證了機體的健康,。和細胞增殖一樣細胞凋亡也是受基因調(diào)控的精確過程。

細胞功能研究相關檢測：

2D細胞培養(yǎng)和觀察

3D細胞培養(yǎng)和觀察

原代細胞分離/培養(yǎng)/鑒定

細胞增殖/毒性檢測（MTT 法/CCK8 法）

細胞凋亡檢測（AnnexinV FITC/PI雙染流式法/Tunel法）

細胞周期檢測（PI染料標記流式法）

細胞遷移/侵襲檢測（劃痕法/Transwell法）

流式細胞分選（流式細胞術）

細胞免疫熒光檢測

小管形成實驗（tube formation,，體外血管生成實驗）

細胞克隆形成實驗

細胞外泌體分離與鑒定

慢病毒包裝及穩(wěn)轉株篩選

電生理檢測

個性化細胞實驗（藥物篩選等）

細胞模型已經(jīng)于人類疾病研究和治療藥物的篩選領域中得到廣泛應用,。我司可根據(jù)客戶的具體方案提供多種細胞模型的構建及相應的細胞生物學功能檢測。

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