40511ES60 膠原酶V型
- 公司名稱 翌圣生物科技(上海)股份有限公司
- 品牌 Yeasen/翌圣生物
- 型號 40511ES60
- 產(chǎn)地 上海
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時間 2025/4/27 13:23:15
- 訪問次數(shù) 432
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100mg |
---|---|---|---|
貨號 | 40511ES60 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè) |
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號 | 規(guī)格 |
Collagenase V膠原酶V型 | 40511ES60 | 100 mg |
產(chǎn)品描述
膠原酶(Collagenase)是一種蛋白酶,一種肽鏈內(nèi)切酶,,能夠特異性的識別Pro-X-Gly-Pro序列(該序列高頻率出現(xiàn)在膠原中,,很少發(fā)現(xiàn)于其他蛋白中)并切割該序列中性氨基酸(X)和甘an酸(Gly)之間的肽鍵。許多蛋白酶都能水解單鏈且變性的膠原多肽,,但膠原酶是一種可以降解具有三股超螺旋結(jié)構(gòu)的天然膠原纖維的蛋白酶,,這種膠原纖維廣泛存在結(jié)締組織內(nèi)。
本品來源于溶組織梭菌(Clostridium histolyticum),,是一種酶粗提物,,不僅含有膠原酶(更準(zhǔn)確的稱法為梭菌蛋白酶A(clostridiopeptidase A)),能夠降解天然膠原和網(wǎng)狀纖維,。還含有其他的一些蛋白酶、多糖酶,、脂酶等,,分別能夠有效水解結(jié)締組織和上皮組織細胞外基質(zhì)內(nèi)的其他蛋白,多糖和脂質(zhì),,使得本品非常適用于組織消化,。
目前商業(yè)化提供的細菌膠原酶主要根據(jù)膠原酶活性的差異,分為4種類型:膠原酶I型,、II型,、III型和IV型,在應(yīng)用上有所偏向:1)膠原酶I(Type I Collagenase):含有比較均勻的各種酶活力(包括膠原酶,,酪蛋白酶,,梭菌蛋白酶,yi蛋白酶活性)。通常用作上皮細胞,、肝,、肺、脂肪和腎上腺組織細胞的制備,;2)膠原酶II(Type II Collagenase):含有更高的梭菌蛋白酶活性,,通常用于心臟、骨,、肌肉,、肝、甲狀腺和軟骨等組織來源細胞的制備,;3)膠原酶III(Type III Collagenase):含有較低的蛋白酶活性,,常用于乳腺細胞的制備;4)膠原酶IV(Type IV Collagenase):含有低yi酶活性,,通常用于胰島細胞的制備,,或者需要維持受體完整性的細胞制備實驗。
本品為V型膠原酶,,≥125 CDU/mg solid(CDU = collagen digestion units),,具有更高的膠原酶活性和酪蛋白酶活性,更低的yi酶水平以降低對細胞膜蛋白的損傷,,適用于胰腺小島細胞和結(jié)締組織細胞的分離
產(chǎn)品性質(zhì)
分子量(Molecular Weight) | 68-130 kDa |
激活劑(Activators) | Ca2+,、Zn2+ |
抑制劑(Inhibitors) | EDTA, EGTA,Cysteine, histidine, 2-mercaptoethanol, o-phenanthroline DTT, Hg2+, Pb2+, Cd2+, Cu2+, Zn2+, Not inhibited by DFP or serum |
活力單位(Unit definition) | 在37℃,pH7.5 的條件下,,5 h內(nèi)水解膠原產(chǎn)生相當(dāng)于1 µM L- liang氨酸的酶量定義為1個酶活力單位,。 |
運輸和保存方法
室溫運輸。4℃避光保存,,2年有效,。儲存液-20℃避光凍存。
注意事項
1)為了您的安全和健康,,請穿實驗服并戴一次性手套操作,。
2)本產(chǎn)品僅作科研用途!
使用方法
1. 膠原酶儲存液的配制
向每管100 mg的膠原酶中加入100 µL的含Ca2+,、Mg2+的HBSS(Hank’s ping衡鹽溶液,,含Ca2+、Mg2+),,輕輕旋渦震蕩使其充分溶解,,制備成1 g/mL(即1000×)的儲存液。然后用低蛋白結(jié)合性的0.22 μm的濾膜過濾除菌,,分裝成小份量,,然后于-20℃避光凍存,。
使用前于冰上解凍,避免反復(fù)凍融,。其用于組織和細胞分散的常用濃度為:0.5-2.5 mg/mL,,用于軟骨消化的常用濃度為1-2 mg/mL,需要根據(jù)特定的實驗條件或者參考相應(yīng)的文獻資料確定所需的最佳工作濃度,。
2.組織的分離
1)使用無菌手術(shù)dao或剪刀將組織切成3-4 mm大小的組織塊,;
2)利用含Ca2+、Mg2+的HBSS洗滌組織塊數(shù)次,;
3)加入足量的含Ca2+,、Mg2+的HBSS,使其浸沒組織塊,,并加入膠原酶至需要工作濃度,;
4)于37℃孵育4-18 h。消化時使用水平搖床以及用3 mM的CaCl2補充消化可以提高消化效率,。
5) 已分散開的細胞可使用不銹鋼或尼龍網(wǎng)篩篩得,,收集備用。未*解離的組織另外添加適量的新鮮膠原酶工作液于37℃繼續(xù)孵育,;
6)利用不含膠原酶的HBSS洗滌收集的細胞數(shù)次,;
7)細胞培養(yǎng)液重懸上述細胞,利用自動細胞計數(shù)器或其他方法計算活細胞密度,。
8)于細胞培養(yǎng)皿上利用合適細胞培養(yǎng)基接種細胞,。
3. 器官灌注
1)向37℃預(yù)熱的含Ca2+、Mg2+的HBSS中加入膠原酶,,另添加3 mM的CaCl2有助于提高分離效率,;
2)按照已優(yōu)化的速率對相應(yīng)的器官灌注膠原酶工作液;
3)將上述過程中回收的灌注液流經(jīng)不銹鋼或尼龍網(wǎng)篩,,從而將已解離的細胞或小片段組織塊與較大團塊分離開來,,未充分解離的組織需利用新鮮膠原酶工作液于37℃進一步孵育;
4)利用不含膠原酶的HBSS洗滌收集的細胞數(shù)次,;
5)細胞培養(yǎng)液重懸上述細胞,,利用自動細胞計數(shù)器或其他方法計算活細胞密度。
6)于細胞培養(yǎng)皿上利用合適細胞培養(yǎng)基接種細胞,。
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HB211011