支原體污染:實(shí)驗(yàn)室的隱形威脅與翌圣生物的解決方案
定 義
支原體(Mycoplasma)又稱(chēng)霉形體,,是目前發(fā)現(xiàn)的最小,、簡(jiǎn)單的無(wú)細(xì)胞壁的原核生物,直徑大小0.1~0.3μm,,該大小剛好介于細(xì)菌和病毒之間,。其能通過(guò)濾膜且呈高度多形性,是哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)中相對(duì)常見(jiàn)且難以檢測(cè)的污染物。由于能形成絲狀與分枝形狀,,故稱(chēng)為支原體,。
分 類(lèi)
支原體(mycoplasma)是細(xì)菌中最小的一種微生物,在生物學(xué)分類(lèi)中屬于柔膜菌門(mén),、柔膜菌綱,,又分屬于不同目科屬。其中研究較多的支原體目,、支原體科,主要包含支原體屬,、脲原體屬兩個(gè)種屬。
圖1.支原體結(jié)構(gòu)圖
常見(jiàn)形態(tài)
支原體有多種形態(tài),有球形,、桿形,、絲狀、分支狀等,,通??梢栽趻呙桦婄R和透射電鏡下進(jìn)行觀察。細(xì)胞培養(yǎng)上清和細(xì)胞膜是比較適宜支原體生長(zhǎng)的,;寄生在細(xì)胞表面的支原體可以穿透宿主細(xì)胞膜,。
圖2.支原體形態(tài)圖
污染的來(lái)源
主要為細(xì)胞培養(yǎng)液或其成分(如培養(yǎng)基原料、血清和其他試劑),、實(shí)驗(yàn)室操作人員,、細(xì)胞培養(yǎng)箱、液氮培養(yǎng)箱,、空氣中的粒子和氣溶膠,、抗生素的過(guò)度使用、密封不當(dāng)?shù)募?xì)胞培養(yǎng)物和污染了支原體的細(xì)胞等,。
圖3.易受支原體污染的來(lái)源
常見(jiàn)的污染支原體種類(lèi)
細(xì)胞培養(yǎng)中95%的支原體污染主要是由萊氏無(wú)膽甾原體,、精氨酸支原體、豬鼻支原體,、口腔支原體,、發(fā)酵支原體、人型支原體這6種常見(jiàn)支原體引起的,。
表1.污染支原體種類(lèi)
S/N | 支原體 | 主要來(lái)源 | 95%常見(jiàn)的細(xì)胞培養(yǎng)污染物 |
1 | Acholeplasma laidlawii 萊氏無(wú)膽甾原體 | 豬,、牛、禽類(lèi),、植物 | 是 |
2 | Mycoplasma arginini 精氨酸支原體 | 豬,、牛、綿羊,、山羊 | 是 |
3 | Mycoplasma hyorhinis 豬鼻支原體 | 豬 | 是 |
4 | Mycoplasma orale 口腔支原體 | 人 | 是 |
5 | Mycoplasma fermentans 發(fā)酵支原體 | 人 | 是 |
6 | Mycoplasma hominis* 人型支原體 | 人 | 是 |
7 | mycoplasma pneumoniae 肺炎支原體 | 人 | \ |
8 | Mycoplasma salivarium 唾液支原體 | 人 | \ |
9 | Mycoplasma bovis* 牛支原體 | 牛 | \ |
10 | Mycoplasma gallisepticum 雞毒支原體 | 禽類(lèi) | \ |
11 | Mycoplasma synoviae 滑液囊支原體 | 禽類(lèi) | \ |
12 | Spiroplasma citri 螺原體 | 植物 | \ |
污染的方式
支原體一般通過(guò)黏附在宿主上皮細(xì)胞表面,,從而成為人類(lèi),、動(dòng)物和植物的寄生物,通過(guò)攝取宿主細(xì)胞的膽固醇等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和/或代謝產(chǎn)生的毒素,、過(guò)氧化氫等有毒物質(zhì)危害人類(lèi)和動(dòng)植物,,給細(xì)胞制劑和科研工作帶來(lái)負(fù)面影響。
污染的影響
保守估計(jì)常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)中支原體污染率為15~35%,,支原體污染會(huì)對(duì)細(xì)胞內(nèi)代謝或生化合成過(guò)程造成影響,,雖不會(huì)明顯表現(xiàn)為造成細(xì)胞死亡,但卻會(huì)嚴(yán)重干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度,。
圖4 支原體污染的危害
預(yù)防先行
切斷污染源頭
嚴(yán)格檢測(cè)新引入細(xì)胞:所有新細(xì)胞株或原代分離細(xì)胞需通過(guò)支原體檢測(cè)(如qPCR或LAMP法),確保陰性后方可進(jìn)入培養(yǎng)體系,。
規(guī)范實(shí)驗(yàn)操作:穿戴專(zhuān)用防護(hù)裝備,,定期消毒超凈臺(tái)、移液器等設(shè)備,,避免交叉污染,。
環(huán)境管控:細(xì)胞房每周紫外線消毒,每月全面清潔并配合支原體預(yù)防試劑擦拭死角,,維持無(wú)菌環(huán)境,。
精準(zhǔn)清除
高效去除污染
支原體去除試劑-MycAwayTM 支原體去除試劑(1000×)40607ES通過(guò)靶向支原體DNA快速起效,3天即可顯著改善污染,。其低毒性設(shè)計(jì)不損傷宿主細(xì)胞,,且操作簡(jiǎn)便,僅需加入培養(yǎng)基孵育,,廣譜覆蓋95%以上常見(jiàn)支原體類(lèi)型(如豬鼻支原體,、口腔支原體等)。產(chǎn)品特點(diǎn)如下:
去除顯著
支原體污染的細(xì)胞中,,加入翌圣MycAway™ 支原體去除試劑(1000×),,連續(xù)培養(yǎng)1周后,培養(yǎng)基顏色明顯緩解(支原體污染的細(xì)胞,,培養(yǎng)基約1天就會(huì)變黃,,)顯微鏡觀察細(xì)胞狀態(tài),結(jié)果顯示細(xì)胞狀態(tài)明顯改善,,細(xì)胞倍增時(shí)間恢復(fù),。
圖5.支原體去除前后細(xì)胞狀態(tài)比較
毒性低
針對(duì)無(wú)支原體污染的細(xì)胞,同時(shí)使用MycAway™ Treatment(1000×)支原體去除試劑及PBS處理細(xì)胞,,24h后,,分別使用CCK-8和細(xì)胞計(jì)數(shù)的方式對(duì)細(xì)胞活力和增殖進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果顯示,MycAway™ Treatment(1000×)支原體去除試劑對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)無(wú)顯著抑制作用,,毒性低,。
圖6.MycAway™ Treatment(1000×)支原體去除試劑細(xì)胞毒性測(cè)試結(jié)果
翌圣生物
支原體防控的全周期保障
為了構(gòu)建支原體污染的全周期防控體系,翌圣生物科技以創(chuàng)新技術(shù)為核心,,開(kāi)發(fā)了覆蓋“檢測(cè)-清除-預(yù)防”三大維度的完整產(chǎn)品矩陣,,為實(shí)驗(yàn)室提供一站式解決方案:
精準(zhǔn)檢測(cè):支原體qPCR檢測(cè)試劑盒、LAMP等溫?cái)U(kuò)增試劑盒等,,支持快速篩查與藥典級(jí)檢測(cè),,靈敏度達(dá)10 CFU/mL,滿(mǎn)足細(xì)胞治療產(chǎn)品快速放行需求,。
靶向清除:MycAway™支原體去除試劑(細(xì)胞用)及環(huán)境專(zhuān)用消殺試劑,,廣譜覆蓋95%以上污染支原體,3天高效起效,,兼顧細(xì)胞安全性與操作便捷性。
長(zhǎng)效防護(hù):支原體預(yù)防試劑結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)化操作流程,,從新細(xì)胞準(zhǔn)入,、實(shí)驗(yàn)環(huán)境管控到設(shè)備定期消殺,多節(jié)點(diǎn)阻斷污染傳播鏈,。
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產(chǎn)品應(yīng)用 | 產(chǎn)品名稱(chēng) | 貨號(hào) | 規(guī)格 |
支原體去除 | MycAway™Treatment(1000×)-Mycoplasma Elimination Reagent(支原體去除試劑) | 40607ES | 100 μL/ 1mL / 5×1mL |
支原體預(yù)防 | MycAway™ Spray(Ready-to-use) 支原體噴霧劑(即用型) | 40605ES | 500mL / 2×500mL / 10×500mL |
MycAway 支原體預(yù)防試劑(2000×)細(xì)胞生物學(xué) 分離培養(yǎng) | 40608ES | 1mL / 5×1mL | |
MycGuard™-1 Solution(100×),for Disinfecting Water Bath of CO2 Incubator 細(xì)胞培養(yǎng)箱水盤(pán)1號(hào)消毒衛(wèi)士(支原體污染預(yù)防) | 40609ES | 100 mL | |
MycGuard™-2 Solution(500×),for Disinfecting Ordinary Water Bath 水浴鍋2號(hào)消毒衛(wèi)士(支原體污染預(yù)防) | 40610ES | 100 mL | |
支原體檢測(cè) (一步法快檢) | MycAway™Plus-Color One - Step Mycoplasma Detection Kit 一步法快速支原體檢測(cè)試劑盒 | 40612ES | 25T / 100T |
支原體檢測(cè) (PCR) | GMyc-PCR Mycoplasma Test Kit GMyc-PCR支原體檢測(cè)試劑盒 | 40601ES | 10 assays/20 assays |
支原體檢測(cè)(qPCR) | Mycoplasma Real-time qPCR Detection Kit支原體qPCR檢測(cè)試劑盒(探針?lè)ǎ?/span> | 40618ES | 25T / 100T |
MycAway® Mycoplasma Real-time qPCR Detection Kit(2G) 支原體qPCR檢測(cè)試劑盒(探針?lè)ǎ?2G) | 40619ES | 25T / 100T |
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