人皮膚成纖維 HDF-a
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細(xì)胞培養(yǎng)說(shuō)明書(shū)

一,、細(xì)胞培養(yǎng)條件

二、細(xì)胞收到后處理

細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿(mǎn)*培養(yǎng)液并封好瓶口是細(xì)胞運(yùn)輸?shù)淖詈棉k法,。收到細(xì)胞回到自己的實(shí)驗(yàn)室后,，先打開(kāi)外包裝，用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超凈臺(tái)內(nèi),，嚴(yán)格無(wú)菌操作,，培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)。鏡下觀察：未超過(guò)80%匯合度時(shí),，可將瓶裝的*培養(yǎng)液收集至離心管中,，加入6ml*培養(yǎng)基，放入37℃,、5%CO2孵箱培養(yǎng),；超過(guò)80%匯合度時(shí)，根據(jù)情況傳代或者凍存,，具體操作見(jiàn)細(xì)胞培養(yǎng)步驟,。（注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話(huà)，處理完后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松,，傳代后建議一瓶用原瓶里面的*培養(yǎng)基,，另外一瓶用自己配的*培養(yǎng)基）

三、細(xì)胞培養(yǎng)步驟

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液,，補(bǔ)加4-6mL*培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中），培養(yǎng)過(guò)夜,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。

1,、對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái),，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的*培養(yǎng)基終止消化,。

3.輕輕吹打細(xì)胞，*脫落后吸出,，在1000RPM條件下離心8-10分鐘,，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。

4. 按5-6ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)液,，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。

PS：若客戶(hù)收到2ml小管細(xì)胞,，收到細(xì)胞后,，用75%酒精噴灑整個(gè)管子消毒后放到超凈臺(tái)或安全柜內(nèi)，嚴(yán)格無(wú)菌操作,；將小管細(xì)胞轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿,，加入5ml左右*培養(yǎng)基混勻，放入培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)后查看細(xì)胞密度：若密度未超過(guò)80%,，換液繼續(xù)培養(yǎng),，視情況傳代或者凍存。若密度超過(guò)80%,，可直接進(jìn)行傳代（方法同上）,。

售后服務(wù)告知書(shū)

一、收到細(xì)胞處理方法

1. 收到細(xì)胞先不開(kāi)瓶蓋,，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置若干小時(shí)（視細(xì)胞密度而定）穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收細(xì)胞時(shí)就整體外觀拍一張照片,，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,，隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài)，100×,，200×各一張）,，觀察記錄細(xì)胞在運(yùn)輸過(guò)程中是否有污染情況。作為我方進(jìn)行售后的依據(jù),。

2. 收到細(xì)胞未開(kāi)封,，出現(xiàn)污染狀況我們負(fù)責(zé)免費(fèi)重發(fā)一次細(xì)胞。

3. 由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境,、操作和運(yùn)輸?shù)榷喾矫嬉蛩氐挠绊?，故本公司只保證客戶(hù)收到細(xì)胞后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài)，故客戶(hù)需要售后是需出示收到細(xì)胞的時(shí)間證明及客戶(hù)提供收貨時(shí)間和發(fā)現(xiàn)問(wèn)題后與客服人員溝通的時(shí)間證明,，期間間隔時(shí)間不能大于7天,。

4. 如客戶(hù)對(duì)細(xì)胞的種類(lèi),、純度、活性等特性有疑問(wèn),，需提供相應(yīng)的生物學(xué)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果作為依據(jù)。

二,、細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題,，可重發(fā)的情況有哪些？判定標(biāo)準(zhǔn)是什么,？

1. 細(xì)胞運(yùn)輸途中遭遇的各種問(wèn)題,，細(xì)胞丟失、瓶身破損,、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等,，重發(fā)；

2. 細(xì)胞污染問(wèn)題,，請(qǐng)?jiān)谑盏疆a(chǎn)品48小時(shí)內(nèi),，給我們提出真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，核實(shí)后重發(fā),；

3. 常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置24小時(shí)后,，干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇后24小時(shí)后，絕大多數(shù)細(xì)胞未存活,，（需提供真實(shí)清晰的細(xì)胞狀態(tài)照片）,，重發(fā),；

4. 干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇后24小時(shí)后或常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置4小時(shí)候并且未開(kāi)封,，出現(xiàn)污染，重發(fā),；

5. 細(xì)胞活性問(wèn)題,，請(qǐng)?jiān)谑盏疆a(chǎn)品7天內(nèi)給我們提出真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,，用臺(tái)盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力，核實(shí)后予重發(fā),；

6. 細(xì)胞收到當(dāng)天以及第2,3天請(qǐng)拍照,，3天未告知的，視為產(chǎn)品合格,。4-7天內(nèi)出現(xiàn)問(wèn)題有提供收到細(xì)胞前3天照片和細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題時(shí)照片以及細(xì)胞相關(guān)操作的詳細(xì)步驟的,，并跟技術(shù)人員溝通的，由技術(shù)人員判定為我方責(zé)任的,，重發(fā),。技術(shù)人員判定為雙方承擔(dān)責(zé)任的由雙方進(jìn)行協(xié)商處理或者按合同價(jià)的50%收費(fèi)重發(fā)。

三,、細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題,，不予以重發(fā)的情況有哪些？

1. 客戶(hù)造成細(xì)胞污染，不重發(fā),；

2. 客戶(hù)不正確操作致細(xì)胞狀態(tài)不好,，不重發(fā)；

3. 非本庫(kù)推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好,，不重發(fā),；

4. 細(xì)胞狀態(tài)不好，未提供細(xì)胞培養(yǎng)前3天照片的,，不重發(fā),；

5. 細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)經(jīng)其它處理的，不重發(fā),；

6. 細(xì)胞收到2天內(nèi),，未告知，不重發(fā),；

7. 視具體情況而定,。

注意：若對(duì)細(xì)胞鑒定存在爭(zhēng)議，可以在收到細(xì)胞3個(gè)月內(nèi)提供真實(shí)有效的STR檢測(cè)證明,，本公司承諾無(wú)條件退還細(xì)胞款項(xiàng),，其他情況本公司將不予受理