TMB Chromogen Solution (HRP-based Elisa)

TMB顯色液（Elisa HRP顯色用）

產(chǎn)品簡介：

TMB（3,3′,5,5′-Tetramethylbenzidine）是辣根過氧化物酶（HRP）的常用顯色底物之一。在HRP的催化下,，TMB被H2O2氧化生成藍色產(chǎn)物,。主要吸收峰在370nm和652nm。在加入硫酸或者磷酸終止上述反應后，產(chǎn)物轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色,，*大吸收峰為450 m。傳統(tǒng)的TMB顯色試劑通常以AB液形式提供（TMB和H2O2溶液分到兩管,，使用前才可混合使用）,，并且容易產(chǎn)生沉淀，使用起來相對不方便,，且容易導致操作誤差,。為克服以上缺點，我們采用*新的TMB顯色技術(shù),，將所有相關(guān)試劑混合配成單一溶液,，本產(chǎn)品具有以下特點：

1. 即開即用，操作簡單,，使用前無需做AB液混合的準備,；檢測靈敏度不低于AB液體系；

2. 僅由單一溶液組成,，簡化了操作步驟,，也降低了操作誤差，結(jié)果更加穩(wěn)定,；

3. 含有*的穩(wěn)定劑,，保證溶液4℃下長期保存；

4. 相比于其他HRP酶顯色底物（如ABTS和OPD）相比,，檢測靈敏度更高,，而且本TMB溶液不含有DMF或DMSO等有機溶劑，安全無毒,。

本品為單一溶液形式且沉淀可溶型的TMB顯色液,，適用于ELISA檢測，操作時只需加入200μl即用型的顯色液,，做簡單孵育,，加入2M H2SO4終止反應后，即可用分光光度計在450nm處測定吸光度,。本品可供完成約500個樣品的檢測,。另外，本品也可用于血液或血紅蛋白等樣品中過氧化物酶量的檢測,。

使用方法：

1．使用之前,，取出適量單組份TMB顯色液，使其回到室溫再開始使用,。

2．對于ELISA檢測：參考ELISA 檢測試劑盒的實驗步驟,，當加入HRP標記的抗體并孵育一段時間后，用適當洗滌液洗滌3-5次，每次3-5min,。洗滌完畢后,，去除洗滌液，加入200μl TMB顯色液,；對于在96孔板內(nèi)進行的其他適當檢測（如檢測組織或細胞樣品內(nèi)源性過氧化物水平）：直接在96孔板內(nèi)加入10-20μl樣品,，之后加入200μl TMB顯色液。

3．室溫避光孵育3-30min或更長時間（可長達24h）,，直至顯色至預期深淺（此時反應液為藍色）,。

4．加入50μl 2M H₂SO₄終止反應，溶液由藍色轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色,，隨后在450nm測定吸光度,。或著在370nm或652nm測定吸光度,。

常見問題：

一. 背景顯色太深

1．如果背景（沒有樣品的對照）顯色太深,，一方面需考慮使用適當?shù)姆忾]液進行封閉，如商業(yè)化的封閉液或者商業(yè)化的和一抗相同來源的血清（5-10%）進行封閉,。另一方面,，直接使用經(jīng)過適當親和吸附的二抗，以減小二抗的非特異性交叉吸附,。

2．可以考慮縮短顯色時間,，或降低二抗?jié)舛取Ａ硗?，選擇適當強度的洗滌液,，或延長洗滌時間。

3．可考慮TMB底物本身反應過于強烈,。為了避免沉淀的產(chǎn)生,，可在終止反應后馬上讀數(shù)，或者進一步稀釋一抗和HRP結(jié)合物,。 _

二. 沒有顯色或顯色太弱

1．適當提高一抗或二抗的濃度,。檢測二抗效果，滴一滴稀釋二抗在離心管內(nèi),，檢測二抗是否被正常顯色,。

2．可以使用更加靈敏的放大檢測體系，例如使用生物素檢測體系,。

3．可以適當延長顯色時間,。

4．如果上述改進不能獲得預期效果，可以考慮更換效果更好的一抗或ELISA

注意事項：

1,、TMB對人體有刺激性,，操作時請小心,，并注意適當防護以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。

2,、本產(chǎn)品為無色至微藍色透明溶液,，如果發(fā)現(xiàn)TMB顯色液出現(xiàn)混濁或顏色變成較深的藍色，應該停止使用,。

3,、本產(chǎn)品*限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療,，不得用于食品或藥品。

4,、為了您的安全和健康,，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

保存條件：

4℃避光保存,，有效期一年,。