產(chǎn)品簡介：

Hoechst染料是一類在顯微觀察中標(biāo)記DNA的熒光染料,。因?yàn)檫@類熒光染料能標(biāo)記DNA，所以它們也經(jīng)常用于細(xì)胞核和線粒體的顯像觀察,。這類染料中有兩個(gè)相關(guān)的染料Hoechst 33258和Hoechst 33342經(jīng)常使用,。這兩種染料都在紫外光下350nm處被激發(fā)，都在461nm處*大發(fā)射光附近發(fā)射藍(lán)/青色熒光,。Hoechst染料可以用于活細(xì)胞或者固定化細(xì)胞,，并且經(jīng)常用來代替其它核酸染料如DAPI。這兩種染料關(guān)鍵的不同點(diǎn)在于,，Hoechst 33342加有乙基,，這使它具有更強(qiáng)的親脂性，因此能更好的透過完整的細(xì)胞膜,。而且有些種類的細(xì)胞由于可以更有效地將進(jìn)入細(xì)胞的Hoechst染料主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞外,，因此在一些實(shí)驗(yàn)中，Hoechst 33258的滲透性明顯比Hoechst 33342要弱些,。這些染料也可以用來檢測樣品中的DNA含量,，通過繪制發(fā)射光強(qiáng)度與DNA含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線,。

Hoechst 33342是一種可透過細(xì)胞膜并對(duì)DNA染色的細(xì)胞核染色試劑，它在嵌入雙鏈DNA后釋放強(qiáng)烈的藍(lán)色熒光,。Hoechst 33342常用于細(xì)胞凋亡檢測,，染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細(xì)胞儀檢測。Hoechst 33342-DNA的激發(fā)和發(fā)射波長分別為350 nm和460 nm,。

使用方法（適用于大多數(shù)細(xì)胞）：

一．對(duì)于固定的細(xì)胞或組織：

1．對(duì)于細(xì)胞或組織樣品,，固定后，適當(dāng)洗滌去除固定劑,。隨后如果需要進(jìn)行免疫熒光染色,，則*行免疫熒光染色，染色完畢后再按后續(xù)步驟進(jìn)行Hoechst 33342染色,。如果不需要進(jìn)行其它染色,，則直接進(jìn)行后續(xù)的Hoechst 33342染色。

2．對(duì)于貼壁細(xì)胞或組織切片,，可以在蓋玻片上或細(xì)胞培養(yǎng)板中原位染色,，加入少量Hoechst 33342染色液，覆蓋住樣品即可,。對(duì)于懸浮細(xì)胞,，至少加入待染色樣品體積3倍的染色液，并混勻,。室溫放置3-5分鐘,。

3．吸除Hoechst 33342染色液，用TBST ,、PBS或生理鹽水洗滌2-3次,，每次3-5分鐘。

4．直接在熒光顯微鏡下或封片后熒光顯微鏡下觀察,。觀察細(xì)胞凋亡時(shí),，會(huì)看到凋亡細(xì)胞的細(xì)胞核呈致密濃染，或呈碎塊狀致密濃染,。

二．對(duì)于活細(xì)胞或組織：

1．加入適當(dāng)量Hoechst 33342染色液,，必須充分覆蓋待染色的樣品，通常對(duì)于6孔板,，一個(gè)孔需加入1ml 染色液,，對(duì)于96 孔板每一個(gè)孔需加入100ul染色液。

2．在適宜于細(xì)胞培養(yǎng)的溫度培養(yǎng)20-30分鐘,。棄染色液,，用PBS或培養(yǎng)液洗滌2-3次即可進(jìn)行熒光檢測。

注意事項(xiàng)：

1. 熒光染料都存在淬滅的問題，建議染色后盡量當(dāng)天完成檢測,。為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光淬滅封片液,。
2. Hoechst 33342對(duì)人體有一定刺激性,，為了您的安全和健康,，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

保存條件：

-20℃避光保存,，有效期2年,。