質(zhì)粒轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)
- 公司名稱 上海達(dá)為科生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號(hào)
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時(shí)間 2022/12/23 11:40:06
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應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè) |
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常規(guī)轉(zhuǎn)染技術(shù)可分為兩大類,,一類是瞬時(shí)轉(zhuǎn)染,一類是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中,,因此一個(gè)宿主細(xì)胞中可存在多個(gè)拷貝數(shù),產(chǎn)生高水平的表達(dá),,但通常只持續(xù)幾天,,多用于啟動(dòng)子和其它調(diào)控元件的分析。一般來說,,超螺旋質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染效率較高,,在轉(zhuǎn)染后24-72小時(shí)內(nèi)(依賴于各種不同的構(gòu)建)分析結(jié)果,常常用到一些報(bào)告系統(tǒng)如熒光蛋白,,β半乳糖苷酶等來幫助檢測(cè),。后者也稱穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,外源DNA既可以整合到宿主染色體中,,也可能作為一種游離體(episome)存在,。盡管線性DNA比超螺旋DNA轉(zhuǎn)入量低但整合率高。外源DNA整合到染色體中概率很小,,大約1/104轉(zhuǎn)染細(xì)胞能整合,,通常需要通過一些選擇性標(biāo)記,如來氨丙基轉(zhuǎn)移酶(APH,;新霉素抗性基因),,潮霉素B磷酸轉(zhuǎn)移酶(HPH),胸苷激酶(TK)等反復(fù)篩選,,得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的同源細(xì)胞系,。
轉(zhuǎn)染技術(shù)的選擇對(duì)轉(zhuǎn)染結(jié)果影響也很大,許多轉(zhuǎn)染方法需要優(yōu)化DNA與轉(zhuǎn)染試劑比例,,細(xì)胞數(shù)量,,培養(yǎng)及檢測(cè)時(shí)間等。