腫瘤細(xì)胞侵襲
- 公司名稱 上海達(dá)為科生物科技有限公司
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- 更新時(shí)間 2022/12/23 9:47:31
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應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè) |
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Matrigel 是從小鼠EHS肉瘤中提取的基質(zhì)成分,含有LN,、IV型膠原,、接觸蛋白和肝素硫酸多糖,鋪在無(wú)聚乙烯吡硌烷酮的聚碳酸酯濾膜上,,能在DMEM培養(yǎng)基中重建形成膜結(jié)構(gòu),,這種膜結(jié)構(gòu)與天然基質(zhì)膜結(jié)構(gòu)極為相似。濾膜孔徑一般為8um,,而且膜孔都被Matrigel覆蓋,,細(xì)胞不能自由穿過(guò),必須分泌水解酶,,并通過(guò)變形運(yùn)動(dòng)才能穿過(guò)這種鋪有Martrigel 的濾膜,,這與體內(nèi)情況較為相似。鋪有Martrigel的濾膜放在以Blind Well腔或MICS腔上下室之間,,鋪有Martrigel面朝向上室,,在下室中加有趨化劑,,上室加入重懸的瘤細(xì)胞,具有侵襲能力的細(xì)胞在趨化劑誘導(dǎo)下開始穿膜運(yùn)動(dòng),。細(xì)胞穿膜所用的時(shí)間與Martrigel的用量有關(guān),,選擇 25ugMartrigell鋪膜,16小時(shí)后觀察結(jié)果較為合適,。穿過(guò)濾膜的細(xì)胞多數(shù)粘附在濾膜下表面,,可用棉簽將上表面的細(xì)胞拭去,然后用乙醇固定濾膜,,PE染色,,在光鏡下觀察統(tǒng)計(jì)穿過(guò)Martrigel的細(xì)胞數(shù)。另外用Transwell小室也可進(jìn)行重建基質(zhì)膜侵襲分析,,這一方法是在 Transwell小室吊籃式上腔的濾膜上鋪上30ugMartrigel,,加入細(xì)胞72h后觀察結(jié)果。值得注意的是,,細(xì)胞在Transwell腔中培養(yǎng) 72小時(shí)后,,有相當(dāng)數(shù)量穿過(guò)濾膜的細(xì)胞不再粘附在濾膜下表面,而是脫落進(jìn)人下腔溶液中.因此統(tǒng)計(jì)穿過(guò)基質(zhì)膜的細(xì)胞數(shù)目時(shí)應(yīng)把這部分細(xì)胞考慮在內(nèi),。腫瘤細(xì)胞穿過(guò)重建基質(zhì)膜的能力與它的體內(nèi)侵襲轉(zhuǎn)移能力表現(xiàn)出較好的相關(guān)性,,可以用重建基質(zhì)膜模型初篩抗侵襲藥物。
腫瘤細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)(Tumour InvasionAssay)可以:(1)研究各種細(xì)胞因子對(duì)惡性腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的影響,;(2)一些抑制血管生成的新藥研究;(3)研究腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移機(jī)制,。
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