克隆形成實(shí)驗(yàn)
- 公司名稱(chēng) 上海達(dá)為科生物科技有限公司
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- 型號(hào)
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時(shí)間 2022/12/23 9:31:45
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應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè) |
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2.將細(xì)胞懸液作梯度倍數(shù)稀釋?zhuān)拷M細(xì)胞每皿分別接種100個(gè)細(xì)胞于含10ml 37℃預(yù)溫培養(yǎng)液的皿中,并輕輕轉(zhuǎn)動(dòng),,使細(xì)胞分散均勻,。
3.置37℃ 5% CO2及飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2~3周。
4.當(dāng)培養(yǎng)皿中出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的克隆時(shí),終止培養(yǎng),。棄去上清液,,用PBS小心浸洗2次。
5.加純甲醇或1:3醋酸/甲醇5ml,,固定15分鐘,。
6.去固定液,加適量Giemsa應(yīng)用染色液染10~30分鐘
7.用流水緩慢洗去染色液,,空氣干燥,。
8.將平皿倒置并疊加一張帶網(wǎng)格的透明膠片,用肉眼直接計(jì)數(shù)克隆,,或在顯微鏡(低倍鏡)計(jì)數(shù)大于10個(gè)細(xì)胞的克隆數(shù)。后計(jì)算克隆形成率,。
克隆形成率=(克隆數(shù)/接種細(xì)胞數(shù))×100%
9.平板克隆形成試驗(yàn)方法簡(jiǎn)單,,適用于貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞。適宜底物為玻璃的,、塑料瓶皿,。試驗(yàn)成功的關(guān)鍵是細(xì)胞懸液的制備和接種密度。細(xì)胞一定要分散得好,,不能有細(xì)胞團(tuán),,接種密度不能過(guò)大。
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