BCA蛋白定量試劑盒

產(chǎn)品描述
BCA (Bicinchoninic acid) 法是目前應(yīng)用比較廣泛的蛋白質(zhì)濃度測(cè)定方法,?；陔p縮脲反應(yīng)，即在堿性環(huán)境下蛋白質(zhì)將Cu2+還原成Cu⁺,，Cu⁺與BCA試劑形成紫顏色的絡(luò)合物,，在562 nm處有高的吸光值，該反應(yīng)產(chǎn)物的量與蛋白質(zhì)濃度成正比,。測(cè)定其在562 nm處的吸光值,，并與標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)比，即可計(jì)算待測(cè)蛋白的濃度,。該方法快速靈敏,、穩(wěn)定可靠且對(duì)不同種類蛋白質(zhì)變異系數(shù)很小。試劑盒中提供了濃度穩(wěn)定的蛋白標(biāo)準(zhǔn)品用于制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,。
BCA 蛋白定量試劑盒可用于試管法檢測(cè),，也可用于微孔板法檢測(cè)。試管法需較大量蛋白樣品(100 μL)和工作液(2 mL),，蛋白樣品與 BCA 工作液的比率為1:20(v/v),，蛋白質(zhì)測(cè)定范圍為20-2000 μg/mL，采用加強(qiáng)法可以檢測(cè)到 5 μg/mL,；微孔板法操作簡(jiǎn)單方便,，僅需少量(10-25 μL)的蛋白樣品和工作液(200 μL)，蛋白樣品與工作液的比率為1:20(v/v)或者1:8(v/v）,，蛋白質(zhì)測(cè)定范圍為 20-2000 μg/mL,，采用加強(qiáng)法可以檢測(cè)到 5 μg/mL。
我司提供的 BCA 蛋白濃度檢測(cè)試劑盒,，比色皿法50次,，酶標(biāo)法500次。
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產(chǎn)品組分

運(yùn)輸與保存
常溫運(yùn)輸,。常溫保存,，有效期12個(gè)月。
使用方法
一,、配制標(biāo)準(zhǔn)品和工作液

1. 配制 BSA 標(biāo)準(zhǔn)品體系（線性范圍20-2000 μg/mL或者5-250μg /mL標(biāo)準(zhǔn)品制備各2種配置方法,，請(qǐng)根據(jù)習(xí)慣選用恰當(dāng)方式）?！咀ⅰ浚築SA 標(biāo)準(zhǔn)品濃度為2 mg/mL,，稀釋液為蛋白樣品的溶解液，原則上蛋白樣品在什么溶液中,，標(biāo)準(zhǔn)品也宜用什么溶液稀釋,。但也可用水或 1 X PBS 進(jìn)行稀釋。

BSA 標(biāo)準(zhǔn)品體系配制表（配制后可放置于4℃ 冰箱多次使用）
表1.微孔板檢測(cè)BSA 標(biāo)準(zhǔn)品體系配制（線性范圍 20-2000 μg/mL）配置方法一

表2.微孔板檢測(cè)BSA 標(biāo)準(zhǔn)品體系配制（線性范圍 20-2000 μg/mL）配置方法二

表3.BSA標(biāo)準(zhǔn)品體系（微孔板檢測(cè),，線性范圍 5-250μg /mL）配置方法一

表4.BSA標(biāo)準(zhǔn)品體系（微孔板檢測(cè),，線性范圍 5-250μg /mL）配置方法二

2. 配制 BCA工作液
(1) 計(jì)算所需要的總BCA 工作液體積,。總BCA工作液體積=（標(biāo)準(zhǔn)品數(shù)量+待測(cè)樣品數(shù)量）x重復(fù)數(shù)x每個(gè)樣品所需要的BCA 工作液,?！咀ⅰ浚涸嚬芊z測(cè)時(shí)每個(gè)樣品加 2.0 mL BCA 工作液，微孔板檢測(cè)每個(gè)樣品加200 μL BCA 工作液,。
(2) 配制BCA工作液：50 體積的BCA 試劑 A 中加入1 體積的BCA 試劑B（A:B=50:1）,，充分混勻?！咀ⅰ浚築CA工作液裝入密封容器內(nèi),，室溫條件24h 穩(wěn)定。

二,、檢測(cè)方法
1. 試管檢測(cè)方法（樣品:BCA工作液=1:20）
(1) 各取100 μL 標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣品加入到反應(yīng)管中,。
(2) 每管加入2.0 mL BCA 工作液，混勻,。根據(jù)待測(cè)樣品的濃度范圍選擇孵育時(shí)間和溫度,。
標(biāo)準(zhǔn)孵育方法：37℃ 孵育30 min 或者室溫2h（檢測(cè)范圍：20-2000 μg/mL）
增強(qiáng)孵育方法：60℃ 孵育30 min（檢測(cè)范圍：5-250 μg/mL）
【注】：BCA 檢測(cè)蛋白濃度，延長(zhǎng)孵育時(shí)間會(huì)加深顏色反應(yīng),。升高溫度會(huì)加快顯色反應(yīng)，但是溫度升高和時(shí)間延長(zhǎng)會(huì)降低檢測(cè)下限,，以及降低工作線性范圍,。若蛋白濃度很低，可在較高溫度孵育或者適當(dāng)延長(zhǎng)孵育時(shí)間,。
(3) 冷卻到室溫,。在分光光度計(jì)上進(jìn)行檢測(cè)，設(shè)定波長(zhǎng)為 562 nm,，在10 min內(nèi)對(duì)所有樣品讀數(shù),。【注】：由于BCA 反應(yīng)達(dá)不到真正的反應(yīng)終點(diǎn),，即使溫度降低至室溫生色反應(yīng)液會(huì)繼續(xù),。但是，由于室溫下生色比率相當(dāng)?shù)?，因此若?0 min 內(nèi)能對(duì)所有的樣本進(jìn)行 562 nm 吸光度的測(cè)試,，不會(huì)導(dǎo)致明顯錯(cuò)誤。
(4) 根據(jù)BSA 標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度（減去標(biāo)準(zhǔn)品中空白孔的OD 值即最終的讀數(shù)）,，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（X-蛋白濃度μg/mL,；Y-最終的OD 562nm）。依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線和樣品的稀釋倍數(shù)計(jì)算樣品蛋白濃度,。
2. 微孔板檢測(cè)方法（樣品: BCA工作液=1:20）
(1) 各取10 μL標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣品加入到微孔板中,?！咀ⅰ浚簶悠放c工作液比例為1:20，檢測(cè)范圍為125-2000 μg/mL,。若樣品濃度非常低,，可使用25μL 標(biāo)準(zhǔn)品和待檢測(cè)樣品進(jìn)行檢測(cè)（即1:8），這時(shí)試劑盒的檢測(cè)范圍為 20-2000 μg/mL,。
(2) 每孔加入200 μL BCA 工作液,，槍頭吹打充分混勻。蓋上微孔板,，37℃ 孵育30 min,。
(3) 冷卻到室溫，在酶標(biāo)儀上的562 nm 波長(zhǎng)范圍處檢測(cè)吸光度,。
(4) 根據(jù)BSA標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度（減去標(biāo)準(zhǔn)品中空白孔的OD值即最終的讀數(shù)）,，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（ X-蛋白濃度μg/mL；Y-最終的OD 562nm）,。依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線和樣品的稀釋倍數(shù)計(jì)算樣品蛋白濃度,。

注意事項(xiàng)

1. 本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究使用，不得用于臨床診斷,、治療等領(lǐng)域,。

2. BCA兼容性詳見(jiàn)官。

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