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生物大分子的貯藏保存可分為干態(tài)和液態(tài)貯藏兩種,。蛋白質(zhì)失活受多種理化因素的影響,，主要有空氣、溫度,、水分,、光線、酸堿度,、樣品狀態(tài),、微生物活動(dòng)、保存時(shí)間和容器等,。這些因素可單獨(dú)起作用,，但更多情況是協(xié)同作用?？偟膩?lái)說(shuō),，蛋白質(zhì)的保存主要考慮其構(gòu)型穩(wěn)定、活性中心的保護(hù),、避免輔助因子喪失等,，以防止其變性、解聚或降解,。由于溫度和水分對(duì)蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性影響很大,，故蛋白質(zhì)最好是低溫、冷凍或冷凍干燥后低溫干燥保存,。
1. 液態(tài)保存
(1).在低溫下保存 蛋白質(zhì)對(duì)熱敏感,，溫度越高,，穩(wěn)定性越差。因此,，低溫保存蛋白質(zhì)溶液在絕大多數(shù)情況下是有利的。一般蛋白質(zhì)越純,，其穩(wěn)定性越差,。特別是純酶溶液，對(duì)熱很不穩(wěn)定(少數(shù)酶例外,，如核糖酸酶能短期煮沸,，胰蛋白酶能在稀HCl中耐90℃，及某些高溫細(xì)菌產(chǎn)生的耐熱性酶等),，多數(shù)在35℃一40℃以上就會(huì)失活,，難以長(zhǎng)期保存，在普通冰箱中通常也只能保存一周左右,。因此,，液態(tài)蛋白質(zhì)樣品常常在—5℃～—10℃以至—20℃以下冰凍保存比較理想，有時(shí)經(jīng)數(shù)月或數(shù)年仍保留大部分活性,。
但是,，各種蛋白質(zhì)的耐熱性不同，并非溫度越低.穩(wěn)定性越好,。羧肽酶,、脂蛋白和某些抗體經(jīng)冰凍再融解，即*變性破壞,。但某些酶經(jīng)凍融后,，活性反而增加，這可能是由于酶顆粒結(jié)構(gòu)松散,，表面積增大,，暴露出更多活性基團(tuán)的緣故。反復(fù)冰凍和融化一船會(huì)導(dǎo)致蛋白質(zhì)變性.應(yīng)盡量避免,。為了防止凍融損傷,，冰凍保存要求樣品濃度大、體積小,、表面積大,、含鹽低、凍結(jié)迅速,、—70℃以下保存,、用時(shí)迅速融化等。
(2).在穩(wěn)定PH下保存 多數(shù)蛋白質(zhì)只有在很狹窄的pH范圍內(nèi)才穩(wěn)定.超出此范圍即迅速變性,。如鯨肌紅蛋白在等電點(diǎn)PH6.8附近時(shí)穩(wěn)定,，卵類(lèi)粘蛋白在中,、酸性條件下對(duì)熱 穩(wěn)定。蛋白質(zhì)穩(wěn)定存在的PH一般是等電點(diǎn),。因此,，酸性、中性和堿性蛋白酶酌穩(wěn)定pH分別為PH2～PH6,、PH6～PH9和PH5～PH10.5,。但也有例外，如血漿蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)PH4.6,，而其穩(wěn)定pH為6.8,，穩(wěn)定PH與其等電點(diǎn)并不相同。酶的穩(wěn)定PH也并非是酶反應(yīng)的最適PH,，二者有時(shí)可相差l至數(shù)個(gè)pH單位,。所以保存液態(tài)蛋白質(zhì)樣品時(shí)，應(yīng)小心調(diào)到其穩(wěn)定PH范圍內(nèi),。
(3).在高濃度下保存 液態(tài)蛋白質(zhì)易受水化作用影響,，保存時(shí)濃度不能太稀(如1毫克/毫升以下)，否則將可能引起亞基解離,、表面變性或器壁吸咐,。一般蛋白質(zhì)在濃溶液中比較穩(wěn)定，中間樣品的保存可采用濕法沉淀,。需要保存酶溶液時(shí),，其蛋白質(zhì)濃度也應(yīng)大于1%。保存時(shí)間較長(zhǎng)時(shí),，還需加入防腐劑,、蛋白酶抑制劑(protease inhibitor)或其它穩(wěn)定劑。如免疫球蛋白可加 0.04%疊氮鈉,，-20℃下凍存,。蛋白酶抑制劑(protease inhibitor)的選擇：中性蛋白酶常用EDTA，堿性蛋白酶用二異丙基氟磷酸(DFP),、苯甲基璜酰氟(PMSF),，酸性蛋白酶用十二烷基磺酸鈉(SDS)、N —溴琥珀酰亞胺,?；钚灾行臑榻z氨酸的蛋白面加二異丙基氟磷酸，活性中心為巰基的蛋白酶加對(duì)氯汞苯甲酸等,。但某些抑制劑(如DFP,、PMSF)不僅抑制蛋白酶，對(duì)其它酶可能也有抑制作用,，使用時(shí)應(yīng)慎重,。
(4).在保護(hù)劑存在下保存 很早就有人觀察到,，在無(wú)菌條件下，室溫保存了四十五年的血液,，血紅蛋白僅有少量改變,，許多酶仍保留部分活性。另一方面,，有些純酶濃即使冷卻也很不穩(wěn)定,，保存期僅為幾小時(shí)或幾天。上述兩種現(xiàn)象的原因是血液中含有某些使蛋白質(zhì)穩(wěn)定的因家,，而純酶則缺乏這些穩(wěn)定因素。為了較長(zhǎng)期保存蛋白質(zhì)溶液(特別是敏感的純酶 或稀蛋白溶液),，常常加入某些穩(wěn)定劑進(jìn)行保護(hù),。多數(shù)蛋白質(zhì)只有在疏水環(huán)境才能長(zhǎng)期保存。加入某些物質(zhì)可以降低溶液的極性,，避免蛋白質(zhì)變性失活,。一些蛋白質(zhì)在高離子強(qiáng)度(1mol/L~4mol/L或飽和鹽液)的極性環(huán)境下保持活性，中性鹽可穩(wěn)定這類(lèi)蛋白質(zhì),。 一些蛋白質(zhì)表面或內(nèi)部含有半胱氨酸巰基,，易被空氣中的氧緩慢氧化為次磺酸或二硫化物，使蛋白質(zhì)因電荷或(和)形狀發(fā)生改變而失活,。保存時(shí)可加人巰基試劑,，使蛋白質(zhì)處于還原狀態(tài)，并隔絕空氣(甚至真空或惰氣中)密閉保存,。
2.固態(tài)保存
(1).制成干粉或結(jié)晶 固態(tài)蛋白質(zhì)比液態(tài)穩(wěn)定,。一般蛋白質(zhì)含水量超過(guò)10%時(shí)，無(wú)論在室溫或低溫均容易失活,；含水量若降低至5%時(shí).在室溫或冰箱中均比較穩(wěn)定,，但在37℃活性則明顯下降。低含水量對(duì)微生物和化學(xué)活性不利,，一般認(rèn)為,，微生物活性在含水量10%以下、化學(xué)活性在3%以下即被抑制,。長(zhǎng)期保存蛋白質(zhì)的最好辦法是把它們制成結(jié)晶或干粉(現(xiàn)多采用冷凍干燥),。
(2).制成水不溶酶 在多數(shù)情況下，酶經(jīng)固定化后,，對(duì)酸,、堿、蛋白酶,、溫度等穩(wěn)定性提高,，更易于保存,。
(3).制成酶衍生物 這也能提高某些酶的穩(wěn)定性。 總的來(lái)說(shuō),，蛋白質(zhì)的保存主要考慮其構(gòu)型穩(wěn)定,、活性中心的保護(hù)、避免輔助因子喪失等,，以防止其變性,、解聚或降解。由于溫度和水分對(duì)蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性影響很大,，故蛋白質(zhì)最好是低溫,、冷凍或冷凍干燥后低溫干燥保存。
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