大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)簡(jiǎn)介

1. 代謝途徑和基因表達(dá)調(diào)控機(jī)制比較清楚

 1) 全基因組測(cè)序,，共有4405個(gè)開(kāi)放性閱讀框架,；

 2) 基因克隆表達(dá)系統(tǒng)成熟完善；

 3) 繁殖迅速,，培養(yǎng)簡(jiǎn)單,，操作方便，遺傳穩(wěn)定,。

2. 培養(yǎng)周期短

 1) 大腸桿菌繁殖能力強(qiáng),，在營(yíng)養(yǎng)條件充足時(shí)，20~30mins即可繁殖一代,；

 2) 大規(guī)模發(fā)酵成本低,，具有巨大的生存潛力。

3. 目標(biāo)基因表達(dá)水平高

　表達(dá)水平較一般真核表達(dá)系統(tǒng)高,，某些外源基因在大腸桿菌中的表達(dá)量可達(dá)總蛋白的5%~30%,。

4. 遺傳背景清楚

 1) 對(duì)大腸桿菌的遺傳背景和生理特性研究相當(dāng)清楚，已有多種不同的抗藥性,、不同營(yíng)養(yǎng)缺陷型和不同校正突變型的菌株供選擇使用,；

 2) 可以根據(jù)不同的載體而選擇不同的菌株。

5. 抗污染能力強(qiáng),，下游工藝簡(jiǎn)單,，易于控制。

6. 已有大量可供選擇利用的表達(dá)載體,，被美國(guó)FDA批準(zhǔn)為安全的基因工程受體菌,。

艾柏森生物大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)優(yōu)勢(shì)

1. 艾柏森生物大腸桿菌可溶性表達(dá)成功率高達(dá)95%；

2. 艾柏森生物可以提供多種大腸桿菌表達(dá)載體，pET28b,、pET22b,、pGEX-6P-1等。

3. 多種大腸桿菌表達(dá)宿主,，標(biāo)準(zhǔn)表達(dá)菌株BL21,，可增強(qiáng)表達(dá)蛋白的菌株T7E，表達(dá)毒性蛋白的C41,，增強(qiáng)蛋白可溶性表達(dá)的超低溫菌株Arctic,，以及其他經(jīng)過(guò)艾柏森生物分子技術(shù)團(tuán)隊(duì)改造過(guò)的表達(dá)菌株，可以滿足客戶的不同需求,。

4. 表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)化,。通過(guò)對(duì)表達(dá)系統(tǒng)進(jìn)行優(yōu)化，很大程度上解決蛋白不表達(dá)和包涵體的問(wèn)題,，如表達(dá)載體與表達(dá)菌株相容性測(cè)試,、誘導(dǎo)表達(dá)條件的優(yōu)化、復(fù)性等,。

服務(wù)組合

注：

1）表達(dá)純化測(cè)試一般包括2種載體,，3種表達(dá)菌株，2個(gè)表達(dá)溫度,，12個(gè)條件的測(cè)試,，根據(jù)客戶的前期實(shí)驗(yàn)結(jié)果，有可能調(diào)整或縮短試驗(yàn)周期,；

2）我們可提供的備選優(yōu)化條件如下：

經(jīng)典案例

以某原核蛋白為例:

1. 優(yōu)化表達(dá)體系,，包括蘇朱軍、誘導(dǎo)溫度,、誘導(dǎo)時(shí)間,、誘導(dǎo)劑濃度及培養(yǎng)基。

經(jīng)過(guò)3輪優(yōu)化,，我們選擇了BL21+pGEX-6p-1組合，并發(fā)現(xiàn)溫度對(duì)與目標(biāo)蛋白的表達(dá)影響大,，如圖一

圖一:融合蛋白小試SDS-PAGE分析圖

M:ProteinMarker,；：誘導(dǎo)前總蛋白；

2：20℃上清,；3：20℃沉淀,；4：37℃上清；5：37℃沉淀,。

2. 在確定了表達(dá)條件后,，我們對(duì)蛋白進(jìn)行了GST瓊脂糖親和層析嘗試純化,，如圖二，

圖二：GST瓊脂糖親和層析純化SDS-PAGE分析圖

M：Protein marker,；S：上樣,；F：流出；1：20mM GSH洗脫組分,；

3. 在確定純化效率可以接受的條件下,，我們對(duì)蛋白進(jìn)行了大體積發(fā)酵，并終純化SDS-PAGE分析,，如圖三,，融合蛋白經(jīng)過(guò)純化,，SDS-PAGE電泳分析在相應(yīng)位置出現(xiàn)明顯條帶,，表明目的蛋白成功得到了純化。

圖三：蛋白終純化SDS-PAGE分析圖

M：Protein marker,；1：目的蛋白

4. 蛋白濃度測(cè)定

采用SK3071 非干擾型蛋白定量試劑盒測(cè)定蛋白濃度為1.06mg/mL,，待測(cè)樣品體積為10μL，結(jié)果如下：

圖四：蛋白濃度測(cè)定