MDA-MB-231-luc人乳腺癌細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記

二,、細(xì)胞收到后處理

細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿*培養(yǎng)液并封好瓶口是細(xì)胞運(yùn)輸?shù)暮棉k法,。收到細(xì)胞回到自己的實(shí)驗(yàn)室后,，先打開(kāi)外包裝，用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超凈臺(tái)內(nèi),，嚴(yán)格無(wú)菌操作,，培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)。鏡下觀察：未超過(guò)80%匯合度時(shí),，可將瓶裝的*培養(yǎng)液收集至離心管中,，加入6ml*培養(yǎng)基，放入37℃,、5%CO2孵箱培養(yǎng),；超過(guò)80%匯合度時(shí)，根據(jù)情況傳代或者凍存,，具體操作見(jiàn)細(xì)胞培養(yǎng)步驟,。（注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話，處理完后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松,，傳代后建議一瓶用原瓶里面的*培養(yǎng)基,，另外一瓶用自己配的*培養(yǎng)基）

三、細(xì)胞培養(yǎng)步驟

1. 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液,，補(bǔ)加4-6mL*培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中），培養(yǎng)過(guò)夜,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。

2. 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。

1,、對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的*培養(yǎng)基終止消化,。

3.輕輕吹打細(xì)胞,，*脫落后吸出，在1000RP不含鈣,、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次,。

2. 加1-2ml消化液（0.M條件下離心8-10分鐘,，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。

4. 按5-6ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)液,，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。