考馬斯亮藍(lán)法蛋白含量測(cè)試盒

商品詳情：

測(cè)定原理

在酸性溶液中，考馬斯亮藍(lán)G-250與蛋白質(zhì)結(jié)合形成藍(lán)色復(fù)合物,；該復(fù)合物在620nm處有最大吸收峰,， 其顏色的深淺與蛋白質(zhì)的濃度成正比。該方法靈敏度高,，適合微量蛋白質(zhì)分析,。
樣品中AA提取：

1.按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織,，加入1mL試劑一）進(jìn)行室溫勻漿,，然后轉(zhuǎn)移到1.5 mL EP 管中，蓋緊后（防止水分散失）置于沸水浴提取15 min,；自來(lái)水冷卻后,，8000g，，4℃離心10min,，上清液置冰上待測(cè),。

2.細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清,；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL試劑一）,，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W,，超聲3s,，間隔10s，重復(fù)30次）,；8000g,，4℃離心10min，取上清,，置冰上待測(cè),。

3.血清等液體：直接檢測(cè)。

計(jì)算公式如下：

1,、血清（漿）LAP活力的計(jì)算:

單位的定義：每mL血清（漿）每分鐘生成1 nmol的對(duì)硝基苯胺定義為一個(gè)酶活力單位,。

LAP（nmol/min/mL）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=205.8×ΔA

2、組織,、細(xì)菌或細(xì)胞中LAP活力的計(jì)算:

（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：

單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol 對(duì)硝基苯胺定義為一個(gè)酶活力單位,。

LAP（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=205.8×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計(jì)算：

單位的定義：每g組織每分鐘生成1 nmol 對(duì)硝基苯胺定義為一個(gè)酶活力單位。

LAP（nmol/min /g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T=205.8×ΔA÷W

（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：

單位的定義：每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘生成1 nmol 對(duì)硝基苯胺定義為一個(gè)酶活力單位,。

LAP（nmol/min /104 cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(2000×V樣÷V樣總) ÷T=0.103×ΔA

V反總：反應(yīng)體系總體積,，2×10-4 L；ε：對(duì)硝基苯胺摩爾消光系數(shù),，9.72×103 L / mol /cm,；d：比色皿光徑，1cm,；V樣：加入樣本體積,，0.05 mL,；V樣總：加入提取液體積,，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間,，2 min,；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL,；W：樣本質(zhì)量,，g；2000：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，2000萬(wàn),。

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考馬斯亮藍(lán)法蛋白含量測(cè)試盒50管/48樣丙酮激酶(PK)測(cè)試盒/測(cè)紅細(xì)胞

50管/48樣丙酮激酶(PK)測(cè)試盒/測(cè)血,、清血、槳組織

50管/48樣丙酮激酶(PK)測(cè)試盒/分光光度法

100管/96樣丙酮激酶(PK)測(cè)試盒/微量法

50管/48樣丙酮磷雙激酶(PPDK)測(cè)試盒/分光光度法

100管/96樣丙酮磷雙激酶(PPDK)測(cè)試盒/微量法

50管/48樣丙酮羧化酶(PC)測(cè)試盒/分光光度法

100管/96樣丙酮羧化酶(PC)測(cè)試盒/微量法

50管/48樣丙酮脫氫酶(PDH)測(cè)試盒/分光光度法
注意事項(xiàng)：

1. 試劑盒中試劑三,、試劑四和標(biāo)準(zhǔn)品均需臨用前配制,，且避光保存，配制好未使用完的4℃保存且3天內(nèi)使用完畢,。

2. 為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,，需先取1-2個(gè)樣做預(yù)實(shí)驗(yàn)，如果測(cè)定的吸光值過(guò)高（高于2.5）,，用蒸餾水稀釋后再測(cè)定,。

3. 與茚三酮反應(yīng)在570nm處無(wú)吸收峰，因此,，570nm處測(cè)定結(jié)果不含這兩種氨基酸的量,。

4．檢出限為100μmol/L。