試劑產品嘌呤霉素-新聞報道

有效期 4年

溶解性 50 mg/mL in water

別名 二鹽酸嘌呤霉素,；嘌呤霉素鹽酸鹽

英文名稱 Puromycin

CAS 58-58-2

分子式 C22H29N7O5·2HCl

分子量 544.44

儲存條件 -20℃

危險代碼 R:22

純度 PURITY: ≥99%

外觀（性狀） 白色粉末

單位 支

說明：蛋白質合成抑制劑。抑制細菌,、藻類原生物和哺乳動物細胞生長,。

試劑產品嘌呤霉素-新聞報道

嘌呤霉素（Puromycin）是由白黑鏈霉菌（Streptomyces alboniger）發(fā)酵代謝產生的一種氨基糖苷類抗生素，通過抑制蛋白質合成而殺死革蘭氏陽性菌,，各種動物和昆蟲細胞,。某種特殊情況下有效作用大腸桿菌。作用機制在于嘌呤霉素是氨酰-tRNA分子3’末端的類似物,，能夠與核糖體的A位點結合并摻入到延伸的肽鏈中,。嘌呤霉素同A位點結合后,，不會參與隨后的任何反應,，從而導致蛋白質合成的提前終止并釋放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟多肽。

嘌呤霉素產生菌Streptomyces alboniger內發(fā)現的pac基因編碼嘌呤霉素N-乙酰轉移酶（PAC）,，賦予機體對嘌呤霉素產生抗性,。這一特性如今普遍應用于篩選特定攜帶pac基因質粒的哺乳動物穩(wěn)定轉染細胞株。

嘌呤霉素在細胞穩(wěn)轉株篩選中的普遍應用與慢病毒載體的特性有關,，現在商業(yè)化的慢病毒載體多數都攜帶pac基因,。在某些特定情況下，嘌呤霉素亦可以用來篩選轉化攜帶pac基因質粒的大腸桿菌菌株。

試劑產品嘌呤霉素溶解性：溶于水,，參考濃度50mg/ml,。

試劑產品嘌呤霉素使用方法

1.建議使用濃度

哺乳動物細胞：1-10 μg/mL，zui佳濃度需要殺滅曲線來確定,；

大腸桿菌：LB瓊脂培養(yǎng)基篩選穩(wěn)定轉化pac基因的大腸桿菌,，使用濃度為125μg/mL。注：使用嘌呤霉素篩選大腸桿菌穩(wěn)轉株需要精確的pH值調節(jié),，而且受宿主細胞本身的影響,。

試劑產品嘌呤霉素2.溶解方法

用蒸餾水溶解嘌呤霉素配制成50 mg/ml的母液，經0.22 μm濾膜過濾除菌后分裝于-20℃凍存,；也可溶于甲醇,，配制成10 mg/ml的儲存液。

3. 嘌呤霉素殺滅曲線的確定（以shRNA轉染或者慢病毒轉導為例）

嘌呤霉素有效篩選濃度跟細胞類型,、生長狀態(tài),、細胞密度、細胞代謝情況及細胞所處細胞周期位置等有關,。為了篩選到穩(wěn)定表達的shRNA細胞株,，確定殺死未轉染/轉導細胞的zui低濃度嘌呤霉素至關重要。建議初次做實驗的客戶一定要建立適合自身實驗體系的殺死曲線（kill curve）,。

1） Day 1：24孔板內以5~8 x 104 cells/孔的密度鋪板,，鋪足夠量的孔以進行后續(xù)的梯度實驗。37℃細胞孵育過夜,；

2） Day 2：a）準備篩選培養(yǎng)基：含不同濃度嘌呤霉素的新鮮培養(yǎng)基（如0-15μg/mL,，至少5個梯度）；b）往孵育過夜后的細胞內更換新鮮配制的篩選培養(yǎng)基,；之后37℃孵育細胞,；

3） Day 4：更換新鮮的篩選培養(yǎng)基，并觀察細胞存活率,。

4） 根據細胞的生長狀態(tài),，約2-3天更換新鮮的篩選培養(yǎng)基；

5） 每日監(jiān)測細胞,，觀察存活細胞率,，從而確定抗生素篩選開始4-6天內有效殺死非轉染或者所有非轉導細胞的藥物zui低濃度。

4. 哺乳動物穩(wěn)定轉染細胞株的篩選

等轉染含有pac基因的質粒后,，細胞在含有嘌呤霉素的培養(yǎng)基中增殖,，以篩選出穩(wěn)定轉染子。

1）細胞轉染48h后,，將細胞（原樣或稀釋）置于含有適當濃度嘌呤霉素的新鮮培養(yǎng)基中培養(yǎng),。

注意：當細胞處于分裂活躍期時，抗生素作用zui明顯。細胞過于密集,，抗生素產生的效力會明顯下降,。zui好進行細胞分盤使其密度不超過25%。

2）每隔2-3天,，移除和更換含有嘌呤霉素的培養(yǎng)基,。

3）篩選7天后評估細胞形成的病灶。病灶可能需要額外的一周或者更多時間,，這依賴于宿主細胞系和轉染篩選效率,。注意：每日進行細胞生長狀態(tài)的觀察。嘌呤霉素的篩選至少需要48h,，有效濃度嘌呤霉素的篩選周期一般在3-10天,。

4）轉移和放置5-10個抗性克隆到一個35mm的培養(yǎng)皿中，用選擇培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)7天,。此次富集培養(yǎng)是為日后的細胞毒性實驗做準備,。

注意事項

1）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作,。

2）嘌呤霉素為有毒化合物,，操作時請小心拿放。

  備注：產品信息可能會有優(yōu)化升級,。請以實際標簽信息為準,。