ELISA的前期準(zhǔn)備與樣本收集

    利用ELISA 進(jìn)行臨床檢驗(yàn)常見的樣本一般包括血液（指血,，靜脈血），尿,，糞便,，腦脊液,，胸腹水，前列腺液，精液,，陰道分泌物等,，這些樣本收集的時(shí)間、方法和保存都有一定的要求,。

(一) 臨床樣本的收集

A ,、血液樣本

    有些生理因素，如吸煙,、進(jìn)食,、運(yùn)動、情緒波動,、妊娠,、體位等均可影響血液中某些成分的變化，有些甚至還有晝夜變化,。因此血液標(biāo)本的采集應(yīng)盡量避免生理因素干擾,，以條件一致為宜，如無法避免,，應(yīng)在標(biāo)本上注明該因素,。

1．外周血

    一般選取左手無名指內(nèi)側(cè)采血，該部位應(yīng)無凍瘡,，炎癥,，水腫，破損,。如該部位不符合要求,，以其他手指部位代替。對燒傷病人,，可選擇皮膚完整處采血,。由于部分血液常規(guī)技術(shù)（如白細(xì)胞計(jì)數(shù)、分類等）受生理因素影響波動過大,，比較時(shí)宜使條件盡量一致,。涉及到體內(nèi)出、凝血功能的技術(shù)項(xiàng)目（如血小板計(jì)數(shù),，出血時(shí)間或凝血時(shí)間等）的技術(shù),，一定要注意了解患者是否用過抗凝、促凝藥物,，以便在減少或避免干擾因素的影響,。

2．靜脈血

    除涉及各種止血和血栓技術(shù)等項(xiàng)目需采用抗凝靜脈血血漿外，目前絕大多數(shù)技術(shù)項(xiàng)目的分析技術(shù)可直接采用靜脈血的血清,。在血清技術(shù)項(xiàng)目中,，有些（如血糖,，血脂等）受飲食及晝夜因素影響較大，一般以清晨空腹血標(biāo)本為宜,；有些在血中衰變較快（血清酶活性測定如ACP活性等）,，0~4℃貯存活性減弱也不一，這些項(xiàng)目的技術(shù)必須及時(shí)而快速,；有些（如肌酸激酶等）受運(yùn)動等因素影響較大,。抽血時(shí)避免溶血的發(fā)生也十分重要，尤其涉及血鉀,，LDH等的測定。

B ,、尿液樣本

    同血標(biāo)本一樣,，尿液標(biāo)本受飲食、運(yùn)動,、藥物量等因素的影響也較大,，特別是飲食的影響，故一般來說晨尿優(yōu)于隨機(jī)尿,。晨尿是指清晨起床后的第一次尿標(biāo)本,，較濃縮和酸化，有形成分（如血細(xì)胞,，上皮細(xì)胞,，管形）相對集中便于觀察。隨機(jī)尿即隨意一次尿,，留取方便,，但受飲食、運(yùn)動,、藥物影響較甚,，易于出現(xiàn)假陽性和假陰性結(jié)果，如飲食性蛋白尿,，飲食性糖尿,，維sheng素C干擾潛血結(jié)果等。餐后尿（午餐后2小時(shí)收集的患者尿液）適用于尿糖,，尿蛋白和尿膽原的檢查,，此時(shí)的尿標(biāo)本可增加試驗(yàn)敏感性，檢出較輕微的病變,。12小時(shí)尿細(xì)胞計(jì)數(shù)即Addis計(jì)數(shù)（前晚8時(shí)排空膀胱后留取至次日晨8時(shí)的所有尿液）,，因時(shí)間較長，細(xì)菌易繁殖,，須加入防腐劑甲醛,。24小時(shí)尿（第一天晨8時(shí)排空膀胱后留取至次日晨8時(shí)的所有尿液）中化學(xué)物質(zhì)的定量,，包括蛋白，糖,，尿17-酮,、17-羥類固醇，兒茶酚胺,，Ca2+等,，技術(shù)不同的物質(zhì)，選擇不同的防腐劑防腐,。清潔中段尿多用于尿細(xì)菌培養(yǎng),，要求無菌，沖洗外陰后留取標(biāo)本,。所有尿標(biāo)本的收集都應(yīng)足量,，最少12 ml，最好50 ml,，定時(shí)尿須全部收集,，對女性患者應(yīng)避免陰道分泌物、經(jīng)血污染尿標(biāo)本,。

C ,、糞便樣本

    糞便標(biāo)本的技術(shù)對判斷消化系統(tǒng)疾病有重要參考價(jià)值。采集時(shí)要求用干凈的竹簽選取含有粘液,、膿血等異常病變成分的糞便,，對外觀無異常的糞便須從表面、深處及糞端多處取材,。找寄生蟲蟲體及作蟲卵計(jì)數(shù)應(yīng)收集24小時(shí)糞便,。查痢疾阿米巴滋養(yǎng)體應(yīng)于排便后立即檢查，從有膿血和稀軟處取材,，保溫送檢,。查日本血吸蟲蟲卵時(shí)應(yīng)取粘液、膿血部分,，孵化毛蚴時(shí)至少留取30g糞便,，且需盡快處理。檢查蟯蟲卵須用透明薄膜拭子于晚12時(shí)或清晨排便前自肛men周圍皺襞處拭取并立即鏡檢,。隱血試驗(yàn)（化學(xué)法）,，試驗(yàn)前3日禁食肉類及含動物血食物并禁服鐵劑，維sheng素C等,。所有糞便標(biāo)本采集后1小時(shí)內(nèi)應(yīng)檢查完畢,，以防止有形成分受消化酶及pH的破壞。

D ,、腦脊液樣本

    腦脊液標(biāo)本采集后立即送檢,，放置過久將影響檢驗(yàn)結(jié)果：如細(xì)胞變性,，破壞，導(dǎo)致計(jì)數(shù)和分類不準(zhǔn),；有些化學(xué)物質(zhì)如葡萄糖等將分解含量減少,；細(xì)菌發(fā)生自溶影響細(xì)菌的檢出率。腦脊液抽取后一般分裝三個(gè)無菌管,，第一管作細(xì)菌培養(yǎng),，第二管作化學(xué)分析和免疫學(xué)檢查，第三管作一般性狀及顯微鏡檢查,，三管的順序不宜顛倒,。因標(biāo)本采集較難，全部送檢和技術(shù)過程應(yīng)注意安全,。

E ,、胸腹水樣本

    與腦脊液標(biāo)本一樣，采集后的標(biāo)本注意安全,，及時(shí)送檢。一般也分裝三管,，一管作常規(guī)細(xì)胞學(xué)檢查,，一管生化檢查，一管細(xì)菌培養(yǎng),，順序以與腦脊液相同為宜,。

F 、前列腺液樣本

    前列腺液標(biāo)本由前列腺按摩后采集,，液量少時(shí)直接滴在載玻片上及時(shí)送檢,，須注意防止標(biāo)本蒸干，量多時(shí)收集在潔凈干燥的試管中,。若按摩不出前列腺液,，可檢查按摩后的尿液沉渣。

G ,、精液樣本

    精液標(biāo)本采集前應(yīng)禁欲3~7天,，排凈尿液后可用手淫法或其他方法將精液直接排入干凈的容器中，保溫并及時(shí)送檢,。由于精子生成日間變動較大,，一般應(yīng)檢查2~3次（每次間隔1~2周）方可做診斷。

H ,、陰道分泌物樣本

    陰道標(biāo)本采集前24小時(shí)應(yīng)禁止房事,、盆浴、陰道檢查,、陰道灌洗及局部上藥等,，取材所用器械需清潔,。一般用鹽水浸濕的棉拭子自陰道深部或陰道穹后部、宮頸管口等處取材,，制成生理鹽水涂片后觀察陰道分泌物標(biāo)本,，經(jīng)期的女性患者不宜檢查陰道分泌物標(biāo)本。

(二) ELISA 的樣本實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備

在收集樣本前都必須有一個(gè)完整的計(jì)劃,，必須清楚要技術(shù)的成份是否足夠穩(wěn)定,。對收集后當(dāng)天就進(jìn)行

技術(shù)的樣本，及時(shí)儲存在4℃?zhèn)溆?。對于隔天再技術(shù)的樣本,，及時(shí)分裝后凍存在-20℃?zhèn)溆茫袟l件的,，最好-70℃凍存?zhèn)溆?。?biāo)本應(yīng)避免反復(fù)凍融。

    液體類標(biāo)本:  包括血清,、血漿,、尿液、胸腹水,、腦脊液,、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。

1. 血清：

室溫血液自然凝固10-20分鐘后,，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心,。

2. 血漿：

應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,，混合10-20分鐘后,，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心。

3. 尿液：

用無菌管收集,。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心,。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行,。

4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：

技術(shù)分泌性的成份時(shí),，用無菌管收集,。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清,。

5. 培養(yǎng)細(xì)胞

    技術(shù)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右,。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清,。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心,。

6. 組織標(biāo)本

    切割標(biāo)本后,，稱取重量。加入一定量的PBS,，PH7.4,。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度,。加入一定量的PBS（PH7.4）,，或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待技術(shù),，其余冷凍備用,。