TNM-FH 培養(yǎng)基

產(chǎn)品介紹

Grace昆蟲(chóng)培養(yǎng)基（Grace's Insect Medium）最初設(shè)計(jì)為支持澳大利亞白星橙天蠶蛾 (Antherea eucalypti) 細(xì)胞 的生長(zhǎng),，是對(duì)Wyatt培養(yǎng)基的改良,，以更接近 Antherea 血淋巴。Grace用這種培養(yǎng)基建立了第一個(gè)連續(xù)細(xì)胞系,。適 當(dāng)補(bǔ)充添加劑后,，該基本培養(yǎng)基已用于培養(yǎng)各種昆蟲(chóng)細(xì)胞，包括多種鱗翅類以及一些雙翅類昆蟲(chóng),。該培養(yǎng)基主要作為 培養(yǎng)基基礎(chǔ),，用于培養(yǎng)Sf9 和Sf21細(xì)胞系，也用于其它鱗翅類昆蟲(chóng)細(xì)胞系的生長(zhǎng)和維持,。

運(yùn)輸和保存

運(yùn)輸：放置于含有生物冰袋的保溫箱中低溫運(yùn)輸

保存方法：2℃～8℃,，避光,，保存2個(gè)月,；?

注意事項(xiàng)

僅限科研用,。

培養(yǎng)體系中的一些組分是對(duì)人體健康有害的物質(zhì)，請(qǐng)不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內(nèi)部,；這部分有害物質(zhì)的濃度和危害性都較低,，如有接觸，立即用自來(lái)水沖洗即可,。

復(fù)蘇

1) 將恒溫水浴鍋中的水預(yù)熱到 37℃,；

2) 準(zhǔn)備一支 15ml 離心管，加入 5ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基,，放入 37℃水浴鍋中預(yù)熱,；

3) 戴上護(hù)目鏡，厚毛線手套后,，從液氮罐中取出要復(fù)蘇的細(xì)胞,，盡快轉(zhuǎn)入 37℃恒溫水浴鍋中

復(fù)溫晃動(dòng)凍存管以提高復(fù)溫速率；

4) 將融化了的凍存管中的細(xì)胞吸入事先準(zhǔn)備的離心管中,，混勻后,，1000rpm 離心 5min；

5) 準(zhǔn)備一個(gè) T-25 培養(yǎng)瓶,，寫(xiě)上細(xì)胞名稱,、日期，再加入 4ml 培養(yǎng)基,；

6) 離心完成后棄去上清,，用 1ml 培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后，轉(zhuǎn)入 T-25 細(xì)胞培養(yǎng)中,，混勻后轉(zhuǎn)入

CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)靜置,。

傳代 （細(xì)胞傳代建議一傳二）

1) 當(dāng)細(xì)胞匯合度達(dá)到 85%以上時(shí)，可進(jìn)行傳代,。

2) 在生物安全柜內(nèi),，打開(kāi)培養(yǎng)瓶瓶口，收集瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基,；

3) 向培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入 3ml 無(wú)菌的 1×PBS 后,，水平放置培養(yǎng)瓶，使PBS 能夠浸潤(rùn)到培養(yǎng)瓶底面上所有的面積,，吸棄 PBS,；

4) 向瓶?jī)?nèi)加入消化液 1ml，浸潤(rùn)底面后放入 37℃ CO2培養(yǎng)箱中孵育 1~2min；

5) 孵育完成后在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞是否變圓飄起,，若全部消化下來(lái)則直接向培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基中,，將懸液吸入 15ml 離心管；

① 準(zhǔn)備一個(gè)無(wú)菌的 15ml 離心管,，加入 2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基,；

② 將消化下來(lái)的細(xì)胞吸入①中的離心管內(nèi)中和（避免吹打③）；向之前消化的培養(yǎng)瓶中加入 1ml 繼續(xù)消化 2min 左右,，輕拍培養(yǎng)瓶,，95%左右細(xì)胞脫。

6) 1000rpm 離心 5min,；

7) 準(zhǔn)備兩個(gè)新的 T-25 培養(yǎng)瓶,，各加入 4ml培養(yǎng)基。

8) 離心完成后,，棄上清,，用 2ml 培養(yǎng)基重懸離心細(xì)胞，將重懸后的細(xì)胞轉(zhuǎn)入 2 個(gè) T-25 培養(yǎng)瓶,，每個(gè)培養(yǎng)瓶各 1ml,；

9) 水平放置培養(yǎng)瓶，震蕩混勻后,，將培養(yǎng)瓶置于 37℃,，5%CO2培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。 

凍存 （細(xì)胞凍存建議每瓶 T25 凍一支）

1）~6）參照傳代步驟

7）離心完成后,，棄上清,，用 1mL 凍存液重懸細(xì)胞沉淀，然后轉(zhuǎn)入 1.8ml 凍存管中,；

8）將凍存管轉(zhuǎn)入填充滿異丙醇的程序降溫盒中,，之后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱中過(guò)夜降溫；

9）第二天,，取出降溫完成的序降溫盒中的凍存管,，盡快轉(zhuǎn)入液氮罐中保存。

小鼠淋巴細(xì)胞趨化因子(Lptn/LTN/XCL1)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human prostaglandin E2 (PGE2) ELISA Kit 人前列腺素E2(PGE2)試劑盒

Humanadiposediffereiation-relatedprotein,ADRPELISAKit 人脂肪分化相關(guān)蛋白(ADRP)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Humanadipocytefattyacid-bindingprotein,a-FABP試劑盒人脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白(aFABP)試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物ATP生物發(fā)光法定量試劑盒50次

MouseAlanineAminoansferase,ALT/GPTELISAKit小鼠轉(zhuǎn)氨酶/谷轉(zhuǎn)氨酶(ALT/GPT)試劑盒規(guī)格：96T/48T

大鼠載脂蛋白E(APOE)試劑盒 ,，英文名： APOE ELISA Kit

Mouse phospho protein kinase C (P-PKC) ELISA Kit 小鼠0酸化蛋白激酶C(P-PKC)試劑盒

MouseIerleukin9,IL-9ELISAKIT 小鼠白介素9(IL-9)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHumanfractalkine/CX3CL1ELISAKit人趨化因子

細(xì)胞/組織多聚賴載玻片制備試劑盒5次(50至100片)

ELISAKitMMP-9大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶9/明膠酶B

小鼠膠原酶Ⅲ(CollagenaseⅢ)試劑盒   96T/48T

小鼠降鈣素原(PCT)試劑盒   96T/48T

小鼠降鈣素受體(C)試劑盒   96T/48T

小鼠降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)試劑盒   96T/48T

磷酸化Bcl-xL蛋白抗體

性激素結(jié)合球蛋白抗體

 TNM-FH 培養(yǎng)基腦型脂肪酸結(jié)合蛋白(FABP7)重組蛋白 Recombinant Fatty Acid Binding Protein 7, Brain (FABP7)

EGFR Protein Human 重組人 EGFR / HER1 / ErbB1 蛋白

PF4重組人 CXCL4 / PF4 蛋白 Protein

NA Protein H7N9 重組甲型流感 H7N9 (A/Shanghai/1/2013) 神經(jīng)酸酶 (Neuraminidase / NA)

ANXA8重組人 Annexin A8 / ANXA8 蛋白 Protein

?無(wú)菌操作?：細(xì)胞培養(yǎng)需在無(wú)菌環(huán)境下進(jìn)行,，使用前需對(duì)超凈工作臺(tái)進(jìn)行紫外線照射滅菌，定期清潔培養(yǎng)箱,。實(shí)驗(yàn)人員需更換工作服,、鞋套，戴口罩,、手套,。

?器材滅菌?：玻璃器皿,、金屬器械等可采用高壓蒸汽滅菌，塑料制品則多選擇環(huán)氧乙烷滅菌或購(gòu)買已滅菌產(chǎn)品,。

?試劑選擇?：所用培養(yǎng)液,、血清、緩沖液等試劑應(yīng)無(wú)菌,、無(wú)污染,，使用前需進(jìn)行無(wú)菌檢測(cè),。不同細(xì)胞對(duì)培養(yǎng)液成分要求有差異,，應(yīng)按細(xì)胞類型選擇合適培養(yǎng)液。

?培養(yǎng)條件?：多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞適宜培養(yǎng)溫度為37℃,，偏差應(yīng)控制在±0.5℃,。培養(yǎng)箱應(yīng)保持良好密封性，定期檢查氣體濃度與流量,，細(xì)胞培養(yǎng)通常需5%CO2以維持培養(yǎng)液pH值穩(wěn)定,。培養(yǎng)箱內(nèi)濕度應(yīng)保持在95%左右。

?日常觀察?：每天在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài),、生長(zhǎng)狀態(tài)與培養(yǎng)液顏色變化,。

?定期檢測(cè)?：定期對(duì)細(xì)胞進(jìn)行支原體、細(xì)菌,、真菌等污染檢測(cè),。