?無菌操作?：細胞培養(yǎng)需在無菌環(huán)境下進行,，使用前需對超凈工作臺進行紫外線照射滅菌,，定期清潔培養(yǎng)箱。實驗人員需更換工作服,、鞋套,，戴口罩、手套,。

?器材滅菌?：玻璃器皿,、金屬器械等可采用高壓蒸汽滅菌，塑料制品則多選擇環(huán)氧乙烷滅菌或購買已滅菌產(chǎn)品,。

?試劑選擇?：所用培養(yǎng)液,、血清、緩沖液等試劑應無菌,、無污染,，使用前需進行無菌檢測。不同細胞對培養(yǎng)液成分要求有差異,，應按細胞類型選擇合適培養(yǎng)液,。

?培養(yǎng)條件?：多數(shù)哺乳動物細胞適宜培養(yǎng)溫度為37℃，偏差應控制在±0.5℃,。培養(yǎng)箱應保持良好密封性,，定期檢查氣體濃度與流量，細胞培養(yǎng)通常需5%CO2以維持培養(yǎng)液pH值穩(wěn)定,。培養(yǎng)箱內(nèi)濕度應保持在95%左右,。

?日常觀察?：每天在顯微鏡下觀察細胞形態(tài)、生長狀態(tài)與培養(yǎng)液顏色變化,。

?定期檢測?：定期對細胞進行支原體,、細菌、真菌等污染檢測,。

IMDM 培養(yǎng)基

Iscove’s Modified Dulbecco Medium (IMDM),，Guilber 和Iscove將Dulbecco’Medium 改良為 Iscove’s Medium，用于培養(yǎng)紅細胞和巨噬細胞前體,。此種培養(yǎng)液含有硒,、額外的氨基酸和維生素、丙酮酸鈉和HEPES,。并用硝酸鉀取代了硝酸鐵,。IMDM還能夠促進小鼠B淋巴細胞，LPS刺激的B細胞,，骨髓造血細胞,，T細胞和淋巴瘤細胞的生長。IMDM為營養(yǎng)非常豐富的培養(yǎng)液,，因此可以用于高密度細胞的快速增殖培養(yǎng),。

 運輸和保存

運輸：放置于含有生物冰袋的保溫箱中低溫運輸

保存方法：2℃～8℃，避光,，保存2個月,；?

注意僅限科研用。

培養(yǎng)體系中的一些組分是對人體健康有害的物質(zhì),，請不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內(nèi)部,；這部分有害物質(zhì)的濃度和危害性都較低，如有接觸,，立即用自來水沖洗即可,。

復蘇

1) 將恒溫水浴鍋中的水預熱到 37℃；

2) 準備一支 15ml 離心管,，加入 5ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基,，放入 37℃水浴鍋中預熱,；

3) 戴上護目鏡，厚毛線手套后,，從液氮罐中取出要復蘇的細胞,，盡快轉(zhuǎn)入 37℃恒溫水浴鍋中

復溫晃動凍存管以提高復溫速率；

4) 將融化了的凍存管中的細胞吸入事先準備的離心管中,，混勻后,，1000rpm 離心 5min；

5) 準備一個 T-25 培養(yǎng)瓶,，寫上細胞名稱,、日期，再加入 4ml 培養(yǎng)基,；

6) 離心完成后棄去上清,，用 1ml 培養(yǎng)基重懸細胞后，轉(zhuǎn)入 T-25 細胞培養(yǎng)中,，混勻后轉(zhuǎn)入

CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)靜置,。

傳代 （細胞傳代建議一傳二）

1) 當細胞匯合度達到 85%以上時，可進行傳代,。

2) 在生物安全柜內(nèi),，打開培養(yǎng)瓶瓶口，收集瓶內(nèi)的培養(yǎng)基,；

3) 向培養(yǎng)瓶內(nèi)加入 3ml 無菌的 1×PBS 后,，水平放置培養(yǎng)瓶，使PBS 能夠浸潤到培養(yǎng)瓶底面上所有的面積,，吸棄 PBS,；

4) 向瓶內(nèi)加入消化液 1ml，浸潤底面后放入 37℃ CO2培養(yǎng)箱中孵育 1~2min,；

5) 孵育完成后在倒置顯微鏡下觀察細胞是否變圓飄起,，若全部消化下來則直接向培養(yǎng)瓶內(nèi)加入2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基中，將懸液吸入 15ml 離心管,；

① 準備一個無菌的 15ml 離心管,，加入 2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基；

② 將消化下來的細胞吸入①中的離心管內(nèi)中和（避免吹打③）,；向之前消化的培養(yǎng)瓶中加入 1ml 繼續(xù)消化 2min 左右,，輕拍培養(yǎng)瓶，95%左右細胞脫,。

6) 1000rpm 離心 5min,；

7) 準備兩個新的 T-25 培養(yǎng)瓶，各加入 4ml培養(yǎng)基。

8) 離心完成后,，棄上清,，用 2ml 培養(yǎng)基重懸離心細胞，將重懸后的細胞轉(zhuǎn)入 2 個 T-25 培養(yǎng)瓶,，每個培養(yǎng)瓶各 1ml,；

9) 水平放置培養(yǎng)瓶，震蕩混勻后,，將培養(yǎng)瓶置于 37℃,，5%CO2培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),。 

凍存 （細胞凍存建議每瓶 T25 凍一支）

1）~6）參照傳代步驟

7）離心完成后,，棄上清，用 1mL 凍存液重懸細胞沉淀,，然后轉(zhuǎn)入 1.8ml 凍存管中,；

8）將凍存管轉(zhuǎn)入填充滿異丙醇的程序降溫盒中，之后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱中過夜降溫,；

9）第二天,，取出降溫完成的序降溫盒中的凍存管，盡快轉(zhuǎn)入液氮罐中保存,。

小鼠可溶性肌球蛋白重鏈1(sMHC-1)Elisa 試劑盒 96T/48T

Rat macrophage inflammatory protein 3 alpha (MIP-3 alpha /CCL20) ELISA Kit 大鼠巨噬細胞性蛋白3α(MIP-3α/CCL20)試劑盒

HumanFibrinogenlikepeptide2,fgl2ELISAKit 人纖維介素蛋白(fgl2)試劑盒 96T/48T 進口分裝

Humanaldehydedehydrogenase,ALDH試劑盒人乙脫氫酶(ALDH)試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物P型氫ATP酶(H+-ATPase)活性比色法定量試劑盒20次

Mouse6-keto-prostaglandin,6-K-PGELISAKit小鼠6同前列腺素(6-K-PG)試劑盒規(guī)格：96T/48T

大鼠載脂蛋白A2(APOA2)試劑盒 ,，英文名： APOA2 ELISA Kit

Mouse thioredoxin (x) ELISA Kit 小鼠硫氧化還原蛋白(x)試劑盒

MouseMacrophageInflammatoryProtein1α,MIP-1αELISAkit 小鼠巨噬細胞性蛋白1α(MIP-1α/CCL3)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHumanFactorVIII-relatedAigen,FVIIIAgELISAKit人第八因子相關抗原

細胞/組織基因組/線粒體DNA同步萃取試劑盒10/20次

ELISAKitMMP-鼠基質(zhì)金屬蛋白酶10

兔白介素-18(rabbit IL-18)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進口分裝

兔免疫球蛋白G(rabbit IgG)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進口分裝

兔免疫球蛋白M(rabbit IgM)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進口分裝

兔免疫球蛋白E(rabbit IgE)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進口分裝

磷酸化調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白2抗體

血清學定義結(jié)腸癌抗原1抗體

ACE2重組小鼠 ACE2 / Angiotensin-Converting Enzyme 2 蛋白 (His & Fc 標簽) Protein

Ah Receptor(Aryl Hydrocarbon Receptor 0.5mgAh Receptor(Aryl Hydrocarbon Receptor) 芳香烴受體抗原

IZUMO4重組人 IZUMO4 / C19orf36 蛋白 (Fc 標簽) Protein

F7 Protein Human 重組人 Coagulation Factor VII /屬

IMDM 培養(yǎng)基鈣非依賴性0脂酶A2(iPLA2)重組蛋白 Recombinant Phospholipase A2, Calcium Independent (iPLA2)

DAPK3 Protein Human 重組人 DAPK3 / ZIPK 蛋白 (GST 標簽)

PREP重組小鼠 Prolyl endopeptidase / PREP 蛋白 Protein

CXCL13 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CXCL13 / BCA-1 / BLC 蛋白

MAP1LC3B重組人 LC3B / MAP1LC3B 蛋白 Protein