PCR基因擴增儀反應條件的選擇
  PCR反應一般設(shè)置20~40次循環(huán),，每一循環(huán)包括高溫變性、低溫退火,、中溫延伸三步反應,。每一循環(huán)的產(chǎn)物作為下一個循環(huán)的模板。PCR的擴增效率很高,，如果循環(huán)次數(shù)是30次，那么新生DN段理論上達到230拷貝（約為109個分子）,。 PCR反應每個循環(huán)的三個基本反應步驟如下：①模板DNA的變性：模板DNA經(jīng)加熱至94℃左右一定時間后,，使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴增形成的雙鏈DNA產(chǎn)物解離，使之成為單鏈,，以便它與引物結(jié)合,，為下輪反應作準備；②模板DNA與引物的退火（復性）：模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后,，溫度降至55℃左右,，引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結(jié)合；③引物的延伸：溫度升到72℃左右，DNA模板－引物結(jié)合物在TaqDNA聚合酶的作用下,，以dNTP為反應原料,，靶序列為模板，按堿基配對與半保留復制原理,，合成一條新的與模板DNA 鏈互補的半保留復制鏈,。重復循環(huán)變性--退火--延伸三過程，就可獲得更多的“半保留復制鏈”,，而且這種新鏈又可成為下次循環(huán)的模板,。每完成一個循環(huán)需 2～4分鐘，2～3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍,。到達平臺期（Plateau）所需循環(huán)次數(shù)取決于樣品中模板的拷貝,。 PCR技術(shù)的特異性取決于引物與模板結(jié)合的特異性。 PCR儀也叫基因擴增儀,，PCR基因擴增儀是利用PCR技術(shù)對特定基因做體外的大量合成,，用于以檢測DNA/RNA為目的的各種基因分析。

  溫度參數(shù)：
1,、變性：模板變性*與否是PCR成功的關(guān)鍵,，一般先于94℃（或95℃）變性3～10min，接著94℃變性30～60s,。
2,、退火：基因擴增儀退火溫度一般低于引物本身變性溫度5℃。引物長度在15～25bp可通過公Tm=(G+C)×4℃+(A+T)×2℃計算退火溫度,，一般退火溫度在40～60℃之間,，時間為30～45s。如果(G+C)低于50%,，退火溫度應低于55℃,。較高的退火溫度可提高反應的特異性。
3,、延伸：延伸溫度應在Taq酶的適溫度范圍之內(nèi),，一般在70～75℃。延伸時間要根據(jù)DNA聚合酶的延伸速度和目的擴增片段的長度確定,，通常對于1kb以內(nèi)的片段1min是夠用的,。
循環(huán)數(shù)：
PCR的循環(huán)數(shù)主要由模板DNA的量決定，一般20～30次循環(huán)數(shù)較合適,，過多的循環(huán)數(shù)會增加非特異擴增產(chǎn)物,，具體要多少循環(huán)數(shù)可通過預試驗確定。
PCR產(chǎn)物積累規(guī)律：
反應初期產(chǎn)物以2n呈指數(shù)形式增加,，至一定的循環(huán)數(shù)后,，引物,、模板、DNA聚合酶形成一種平衡,，產(chǎn)物進入一個緩慢增長時期（“停滯效應”）,，即“平臺期”。到達平臺期所需PCR循環(huán)數(shù)與模板量,、PCR擴增效率,、聚合酶種類、非特異產(chǎn)物竟爭有關(guān),。