試劑的組成和配制：

提取液：液體 100mL×1 瓶,，4℃保存,；

試劑一：液體 5mL×1 瓶，4℃保存；

試劑二：液體 200μL×1 支,，4℃保存,；

試劑三：液體 4mL×1 瓶，4℃保存,；

試劑四：粉劑×2 瓶,，4℃保存。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

產(chǎn)品名稱：Alanopine脫氫酶 (ADH)活性測(cè)定試劑盒科研

規(guī)格：48樣 96樣

貨號(hào)：AS334

檢測(cè)方法：紫外分光光度法 微板法

產(chǎn)品分類：呼吸代謝途徑系列

貯存溫度：2～8℃,。

本試劑盒保質(zhì)期：6個(gè)月,。本產(chǎn)品僅用于科研實(shí)驗(yàn)。

所需的儀器和用品：

可見分光光度計(jì),、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）,、低溫離心機(jī)、移液器,、研缽,、冰和蒸餾水

四、超氧化物歧化酶（SOD）的測(cè)定：

建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定,，了解本批樣品情況,，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn)

樣本和試劑浪費(fèi),！

1,、樣本制備

① 組織樣本：

取約 0.1g 組織（水分充足的樣本可取 0.25g），加入 1mL 提取液,，在 4oC 或冰浴進(jìn)行

勻漿(或使用各類常見勻漿器),。4oC×12000rpm 離心 10min，取上清作為待測(cè)液,。

【注】：若增加樣本量,，可按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進(jìn)行提取

② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本：

先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清,；取約 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL

提取液,，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 200W,，超聲 3s,，間隔 10s，重復(fù) 30 次）,；

12000rpm 4℃離心 10min,，取上清，置冰上待測(cè),。

【注】：若增加樣本量,，可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量（10

4）：提取液（mL）為 500~1000：1 的比例進(jìn)行提取,。 ③ 液體樣本：直接檢測(cè)；若渾濁,，離心后取上清檢測(cè),。

DCAKD  脫磷結(jié)構(gòu)域抗體 規(guī)格: 0.2ml

Goat Anti-rat IgG/Cy7  Cy7標(biāo)記的羊抗大鼠IgG 規(guī)格: 0.1ml

DSN1  著絲粒相關(guān)DSN1抗體 規(guī)格: 0.2mlACADL  酰基脫鏈抗體 0.1ml

Phospho-EGFR (Tyr1138)  磷化表皮生因子受體抗體 規(guī)格: 0.1ml

phospho-TRIM25(The91)  磷化雌激反應(yīng)指狀抗體 規(guī)格: 0.1mlNIT2  NIT2抗體 規(guī)格: 0.2ml

CDO1  半雙加氧1抗體 規(guī)格: 0.2ml

bFGF/FGF2  性成纖維細(xì)胞生因子抗體 規(guī)格: 0.1mlCD44/HCAM/PGP1  CD44抗體 規(guī)格: 0.1ml

Phospho-5-Lipoxygenase(Ser271)  磷化5-脂氧合抗體 0.1ml

SEMA4D/CD100  臂板4D抗體 規(guī)格: 0.2mlGoat Anti-Bovine IgG/Alexa Fluor 555  Alexa Fluor 555標(biāo)記的羊抗牛IgG 規(guī)格: 0.1ml

Prkg1/cGKI  cGMP依賴性激1抗體 規(guī)格: 0.1ml

B3GALNT1  β1,，3半糖轉(zhuǎn)移3抗體 規(guī)格: 0.2ml

Alanopine脫氫酶 (ADH)活性測(cè)定試劑盒科研751-03-1黃柏 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg

龍膽（龍膽） 規(guī)格： 0.5

81720-05-0地黃A 規(guī)格： HPLC≥98%;5mg

22338-71-2遠(yuǎn)志 規(guī)格： 20mg

棓丙酯 規(guī)格： 50mg

651-06-9磺胺對(duì)甲氧;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書 規(guī)格： 0.25g

1072-93-1(R)-5-乙烯基-2-惡唑啉 規(guī)格： HPLC≥98%,，20mg/vial

73069-25-7白花前胡甲 規(guī)格： 20mg

金諾芬 規(guī)格： 100mg

23627-87-4三葉豆 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg

操作步驟:

實(shí)驗(yàn)開始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）,；試劑或樣品稀釋時(shí),，均需混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡,。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量,，如樣品濃度過高時(shí)，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋,，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍,，計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

1.        加樣：分別設(shè)空白孔,、標(biāo)準(zhǔn)孔,、待測(cè)樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl，注意不要有氣泡,，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻,，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,，37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液,。

2.        棄去液體，甩干,，不用洗滌,。每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100μl（在使用前一小時(shí)內(nèi)配制），酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘,。

3.        溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體,，甩干,，洗板3次,，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔,，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）,。

4.        每孔加檢測(cè)溶液B工作液（同檢測(cè)A工作液） 100μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘,。

5.        溫育60分鐘后,，棄去孔內(nèi)液體，甩干,，洗板5次,，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔,，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）,。

6.        依序每孔加底物溶液90μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內(nèi),，此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）,。

7.       依序每孔加終止溶液50μl,，終止反應(yīng)，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色,。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同,。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液,。

8.       用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度（OD值）,。在加終止液后立即進(jìn)行檢測(cè)。