產(chǎn)品簡介：

產(chǎn)品名稱：Ca2+ Mg2+—ATP酶試劑盒科研

規(guī)格：24樣 48樣

貨號：AS326

檢測方法：可見分光光度法 微板法

產(chǎn)品分類：呼吸代謝途徑系列

貯存溫度：2～8℃。

本試劑盒保質(zhì)期：6個月,。本產(chǎn)品僅用于科研實驗,。

試劑的組成和配制：

提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存,；

試劑一：液體 5mL×1 瓶,，4℃保存；

試劑二：液體 200μL×1 支,，4℃保存,；

試劑三：液體 4mL×1 瓶，4℃保存,；

試劑四：粉劑×2 瓶,，4℃保存。

所需的儀器和用品：

可見分光光度計,、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）,、低溫離心機、移液器,、研缽,、冰和蒸餾水

四、超氧化物歧化酶（SOD）的測定：

建議正式實驗前選取 2 個樣本做預(yù)測定,，了解本批樣品情況,，熟悉實驗流程，避免實驗

樣本和試劑浪費,！

1,、樣本制備

① 組織樣本：

取約 0.1g 組織（水分充足的樣本可取 0.25g），加入 1mL 提取液,，在 4oC 或冰浴進行

勻漿(或使用各類常見勻漿器),。4oC×12000rpm 離心 10min，取上清作為待測液,。

【注】：若增加樣本量,，可按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進行提取

② 細菌/細胞樣本：

先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清,；取約 500 萬細菌或細胞加入 1mL

提取液,，超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 200W,，超聲 3s,，間隔 10s，重復(fù) 30 次）,；

12000rpm 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測,。

【注】：若增加樣本量,，可按照細菌/細胞數(shù)量（10

4）：提取液（mL）為 500~1000：1 的比例進行提取。 ③ 液體樣本：直接檢測,；若渾濁,，離心后取上清檢測。

冰凍切半蛋-4（CASPASE-4）活性原位熒光染色檢測試劑盒  50次

活體細胞半蛋-5（CASPASE-5）活性原位熒光染色檢測試劑盒  20次

冰凍切半蛋-5（CASPASE-5）活性原位熒光染色檢測試劑盒  50次

活體細胞半蛋-6（CASPASE-6）活性原位熒光染色檢測試劑盒  20次

冰凍切半蛋-6（CASPASE-6）活性原位熒光染色檢測試劑盒  50次

活體細胞半蛋-7（CASPASE-7）活性原位熒光染色檢測試劑盒  20次

冰凍切半蛋-7（CASPASE-7）活性原位熒光染色檢測試劑盒  50次

活體細胞半蛋-8（CASPASE-8）活性原位熒光染色檢測試劑盒  20次

冰凍切半蛋-8（CASPASE-8）活性原位熒光染色檢測試劑盒  50次

Ca2+ Mg2+—ATP酶試劑盒科研胚胎干細胞（ES）凍存試劑盒  50次

胚胎干細胞分化定性檢測試劑盒  20次

胚胎干細胞未分化定性熒光檢測試劑盒  10次

胚胎干細胞內(nèi)胚層（endoderm）細胞分化熒光檢測試劑盒  10次

胚胎干細胞中胚層（mesoderm）細胞分化熒光檢測試劑盒  10次

胚胎干細胞外胚層（ectoderm）細胞分化熒光檢測試劑盒  10次

胚胎干細胞心肌細胞（cardiomyocyte）定向分化試劑盒  5次

胚胎干細胞神經(jīng)細胞（neuron）定向分化試劑盒  5次

胚胎干細胞內(nèi)皮細胞（endothelial）定向分化試劑盒  5次

胚胎干細胞造血細胞（hematopoitic）定向分化試劑盒  5次

操作步驟:

實驗開始前,，各試劑均應(yīng)平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）,；試劑或樣品稀釋時，均需混勻,，混勻時盡量避免起泡,。實驗前應(yīng)預(yù)測樣品含量，如樣品濃度過高時,，應(yīng)對樣品進行稀釋,，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍，計算時再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù),。

1.        加樣：分別設(shè)空白孔,、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔,?？瞻卓准訕悠废♂屢?00μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl,，注意不要有氣泡,，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻,，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘,。為保證實驗結(jié)果有效性,，每次實驗請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.        棄去液體,，甩干,，不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl（在使用前一小時內(nèi)配制）,，酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘,。

3.        溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體,，甩干,，洗板3次,，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔,，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）,。

4.        每孔加檢測溶液B工作液（同檢測A工作液） 100μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘,。

5.        溫育60分鐘后,，棄去孔內(nèi)液體，甩干,，洗板5次,，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔,，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）,。

6.        依序每孔加底物溶液90μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內(nèi),，此時肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）,。

7.       依序每孔加終止溶液50μl,，終止反應(yīng)，此時藍色立轉(zhuǎn)黃色,。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同,。為了保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液,。

8.       用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）,。在加終止液后立即進行檢測。