實(shí)時(shí)熒光定量PCR：

盒實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點(diǎn)檢測(cè)的局限，實(shí)現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測(cè)一次熒光信號(hào)的強(qiáng)度,，并記錄在電腦軟件之中,，通過(guò)對(duì)每個(gè)樣品Ct值的計(jì)算，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果,。因此,，實(shí)時(shí)熒光定量PCR無(wú)需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個(gè)基礎(chǔ)之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達(dá)Ct值所在的循環(huán)數(shù)時(shí),，剛剛進(jìn)入真正的指數(shù)擴(kuò)增期（對(duì)數(shù)期），此時(shí)微小誤差尚未放大,，因此Ct值的重現(xiàn)性*,，即同一模板不同時(shí)間擴(kuò)增或同一時(shí)間不同管內(nèi)擴(kuò)增，得到的Ct值是恒定的,。
2）Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對(duì)數(shù)存在線性關(guān)系,，可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知樣品進(jìn)行定量測(cè)定，因此,，實(shí)時(shí)熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法,。
外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴的科學(xué)方法,。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線的實(shí)時(shí)熒光定量PCR是迄今為止定量最準(zhǔn)確,，重現(xiàn)性的定量方法，已得到全世界的*,，廣泛用于基因表達(dá)研究,、轉(zhuǎn)基因研究，藥物療效考核,、病原體檢測(cè)等諸多領(lǐng)域,。

框

熒光化學(xué)物質(zhì)：
實(shí)時(shí)熒光定量PCR所使用的熒光物質(zhì)可分為兩種：熒光探針和熒光染料。現(xiàn)將其原理簡(jiǎn)述如下：
1. TaqMan熒光探針：PCR擴(kuò)增時(shí)在加入一對(duì)引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針,，該探針為一寡核苷酸,，兩端分別標(biāo)記一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)和一個(gè)淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時(shí),，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收,；PCR擴(kuò)增時(shí),，Taq酶的5'－3'外切酶活性將探針酶切降解,，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào),，即每擴(kuò)增一條DNA鏈,，就有一個(gè)熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步,。而新型TaqMan-MGB探針使該技術(shù)既可進(jìn)行基因定量分析,，又可分析基因突變（SNP），有望成為基因診斷和個(gè)體化用藥分析的技術(shù)平臺(tái),。
2. SYBR熒光染料：在PCR反應(yīng)體系中,，加入過(guò)量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料非特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后,，發(fā)射熒光信號(hào),，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號(hào),，從而保證熒光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。SYBR僅與雙鏈DNA進(jìn)行結(jié)合,，因此可以通過(guò)溶解曲線,，確定PCR反應(yīng)是否特異。
3. 分子信標(biāo)：是一種在5和3末端自身形成一個(gè)8個(gè)堿基左右的發(fā)夾結(jié)構(gòu)的莖環(huán)雙標(biāo)記寡核苷酸探針,，兩端的核酸序列互補(bǔ)配對(duì),，導(dǎo)致熒光基團(tuán)與淬滅基團(tuán)緊緊靠近，不會(huì)產(chǎn)生熒光,。PCR產(chǎn)物生成后,，退火過(guò)程中，分子信標(biāo)中間部分與特定DNA序列配對(duì),，熒光基因與淬滅基因分離產(chǎn)生熒光 ,。
探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

以下產(chǎn)品是公司正在*產(chǎn)品：
復(fù)
定量PCR除可以對(duì)樣品的初始濃度進(jìn)行準(zhǔn)確定量外，還有其它多種豐富的應(yīng)用,。還包括基因表達(dá)調(diào)控情況的分析,、等位基因的分析等。
熒光定量PCR服務(wù)：
簡(jiǎn)介：實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國(guó)Applied Biosystems公司推出,，該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍,，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強(qiáng),、有效解決PCR污染問(wèn)題,、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn)，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測(cè)細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化,；比較不同組織的mRNA表達(dá)差異,；驗(yàn)證基因芯片，siRNA干擾的實(shí)驗(yàn)結(jié)果等,。我公司為您提供全套實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)服務(wù),，全部實(shí)驗(yàn)皆使用進(jìn)口試劑完成，主要定量PCR儀器,。
1,、熒光定量PCR服務(wù)要求：
（01）請(qǐng)您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）,；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）,。
（02）請(qǐng)?zhí)峁┮阎娜L(zhǎng)基因序列。
（03）請(qǐng)?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料：DNA/RNA 來(lái)源等
2,、熒光定量PCR操作程序
（01）引物（探針）設(shè)計(jì)與合成,。
（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA,。
（03）進(jìn)行Real Time PCR實(shí)驗(yàn),，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析,。
（04）實(shí)驗(yàn)完成后，提供完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實(shí)驗(yàn)材料,。
3,、熒光定量PCR的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)：
  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進(jìn)行不同的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)。