其它elisa試劑盒制備步驟:
1,、抗原表位的計(jì)算機(jī)篩選,。
2、抗原的制備,。
3,、血清的采集。
4,、間接其它elisa試劑盒方法的建立,。
5、間接ELISA方法的敏感性和特異性驗(yàn)證,。
6,、試劑盒的穩(wěn)定性驗(yàn)證。
其它elisa試劑盒組成結(jié)構(gòu):
1,、 血清:操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激,。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,,1000×g離心10分鐘將血紅細(xì)胞迅速小心地分離,。
2、 血漿:EDTA,、檸檬酸鹽,、肝素血漿可用于檢測(cè),。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3,、 細(xì)胞上清液:1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物,。
4、 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎,。1000×g離心10分鐘,,取上清液。
5,、 保存:如果樣品不立即使用,,應(yīng)將其分成小部分-70℃保存,避免反復(fù)冷凍,。盡可能的不要使用溶血或高血脂血,。如果血清中大量顆粒,檢測(cè)前先離心或過(guò)濾,。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍,。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
其它elisa試劑盒安全性:
1. 避免直接接觸終止液和底物A,、B,。一旦接觸到這些液體,請(qǐng)盡快用水沖洗,。
2. 實(shí)驗(yàn)中不要吃喝,、抽煙或使用化妝品。
3. 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份,。
4. 其它elisa試劑盒應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存,,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,,不可保存,。
5. 實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,,以免變質(zhì)。
6. 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好,。不同批號(hào)的試劑不要混用,。保質(zhì)前使用。
7. 使用一次性的吸頭以免交叉污染,,吸取終止液和底物A,、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器,。
8. 使用干凈的塑料容器配置洗滌液,。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品,。
9. 洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水,。
10. 底物A應(yīng)揮發(fā),,避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感,,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下,。避免用手接觸,有毒,。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值,。
11. 加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣,。
12. 按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間,、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
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