玉米赤霉烯酮（ZON）ELISA檢測試劑盒
（貨號：MZ570）

本試劑盒用于定量檢測樣本中玉米赤霉烯酮殘留,。

檢測樣本：谷物、飼料,、酒糟

樣本前處理：

-研磨,、甲醇-水溶液提取、過濾或離心,；

分析時間：15分鐘（不包括樣本前處理時間）

檢測限：

-谷物：25ppb

特異性：交叉反應(yīng)率（%）

1. 檢測原理

本試劑盒在預(yù)包被特異性玉米赤霉烯酮抗體的微孔內(nèi)進(jìn)行,。將酶標(biāo)玉米赤霉烯酮和標(biāo)準(zhǔn)品或樣本在預(yù)混合孔混合后轉(zhuǎn)移到包被玉米赤霉烯酮抗體的微孔，孵育時,，標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本中的玉米赤霉烯酮和酶標(biāo)玉米赤霉烯酮競爭微孔上的玉米赤霉烯酮抗體結(jié)合位點,，洗板除掉所有未結(jié)合的酶標(biāo)玉米赤霉烯酮或自由玉米赤霉烯酮分子。然后加入一定量顯色底物反應(yīng)以檢測酶活性,。加終止液終止反應(yīng),，450nm波長酶標(biāo)儀檢測，標(biāo)準(zhǔn)品或樣品中的玉米赤霉烯酮濃度與吸收光強(qiáng)度成反比,。

2.試劑盒組成
微孔板：96孔，預(yù)包被玉米赤霉烯酮抗體,。板條可拆開單獨使用,。

預(yù)混合板：空白，未包被抗體,。

玉米赤霉烯酮標(biāo)準(zhǔn)溶液：5瓶,，各1.5ml，濃度分別為：0ppb,，25ppb,，100ppb，500ppb,，2000ppb,。

酶偶聯(lián)物：1瓶，14ml,。

10X濃縮洗液：1瓶,，50ml。

顯色液：1瓶,，15ml,。

終止液：1瓶，9ml。

3.需要使用但試劑盒不提供的試劑和設(shè)備
-甲醇

-蒸餾水或去離子水

-NaCl

-天平

-研磨器

-搖床（可選）

-臺式離心機(jī)或Whatman 1濾紙

-恒溫箱

-氮吹儀

-20-200μl,、100-1000μl移液器及吸頭
-50-300μl多道移液器及吸頭
-含450nm波長的酶標(biāo)儀

4.注意事項
-僅用于體外檢測,。
-一些試劑內(nèi)含防腐劑；終止液內(nèi)含有硫酸,，具有腐蝕性,；酶偶聯(lián)物對身體有害。
-小心操作,，避免試劑接觸皮膚,、眼睛和粘膜。

5.操作和存儲說明
-2-8°C冷藏保存,，切勿冷凍,。
-將未用完的板條用試劑盒提供的鋁箔袋重新密封。
-切勿使用過期產(chǎn)品,。
-不同批次試劑盒內(nèi)的成分不能混用,。
-請使用試劑盒內(nèi)提供的說明書。

6.樣本前處理步驟

-將樣本混合均勻并充分研磨,；

-稱取50g研磨樣本,，并加入10g NaCl，再加入250ml 70%甲醇溶液,。可選方案：稱取5g研磨樣本,，并加入1g NaCl，再加入25ml 70%甲醇溶液,。

-充分振蕩3分鐘,。

-選擇下列步驟的其中一個：1）過濾樣本（Whatman 1）并收集濾液；2）3500g離心力下離心5分鐘,，并收集上清液,。如果濃度范圍在10-2000ppb，所得濾液或上清液可直接用于檢測,。否則,，用70%甲醇溶液稀釋樣本5倍，以獲得125-10000ppb濃度范圍,。

建議樣本的稱取量為50g,，以使得到更具代表性的樣本。

7．工作溶液準(zhǔn)備

玉米赤霉烯酮標(biāo)準(zhǔn)品：即用,；

酶偶聯(lián)物：即用,；

洗液：用蒸餾水1：10稀釋（1+9）。注意：如果出現(xiàn)結(jié)晶,，將溶液置于室溫并攪拌直至結(jié)晶*溶解,。

稀釋后的洗液在室溫放置24小時內(nèi)有效，2-8°C放置兩周內(nèi)有效。

顯色液：即用,。顯色液對光敏感,，應(yīng)避免光直射，避光保存,。

終止液：即用,。

8.檢測步驟

8.1檢測前注意事項

-檢測前將所有試劑室溫放置1小時；

-使用后立即將所有試劑放置于2-8°C,；

-不得改變檢測程序,；

-不得延長或縮短孵育時間；

-孵育溫度不得高于25°C或低于18°C,；

-孵育過程中不得晃動酶標(biāo)板,；

-使用精準(zhǔn)的移液器及吸頭；

-一旦開始實驗,，不要間斷地完成所有步驟,，不要讓微孔干透；

-ELISA方法結(jié)果的再現(xiàn)性很大程度取決于洗板過程的效率和*性,，要按照介紹的程序洗板,；

-為避免交叉污染，加不同樣品和標(biāo)準(zhǔn)品時要更換移液器吸頭,；

-不得讓吸頭接觸到微孔內(nèi)的液體或者微孔內(nèi)表面,；

-孵育時要避免光直射。建議孵育時用封板膜封板,。

8.2檢測步驟

1.計算需要用到的微孔數(shù)量,，標(biāo)記zui大光吸收值孔、標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔的位置,。注意要考慮到都要做重復(fù),。取出需要的板條,，并將未使用的板條重新用鋁箔袋密封,。準(zhǔn)備同等數(shù)量的預(yù)混合板條。

2.每個預(yù)混合孔加100μl酶偶聯(lián)物,。

3.將標(biāo)準(zhǔn)品,、樣本加50μl到對應(yīng)預(yù)混合孔。

4.用移液器將預(yù)混合孔內(nèi)溶液混勻（上下吹打3次）,，并立即吸取100μl到對應(yīng)包被嘔吐毒素抗體的微孔,。注意：吸取不同微孔溶液時，要更換吸頭以避免交叉污染,。

5.室溫孵育10分鐘,。不得延長孵育時間，孵育時不要晃動微孔板。

6.洗板順序

-孵育后,，倒掉孔內(nèi)液體,；

-將微孔加滿工作濃度洗滌液，然后倒掉洗滌液,；

-用力上下在吸水紙上拍板,，將微孔內(nèi)液體*拍干。

重復(fù)洗滌過程3次,。

在干凈的吸水紙上拍板,，拍干微孔內(nèi)的液體。但不可使微孔干透,。

7.顯色：用多道移液器加100μl顯色液到微孔,，來回晃動數(shù)秒鐘。

8.室溫避光孵育5分鐘,。

9.用多道移液器加50μl終止液到各孔,。來回晃動數(shù)秒鐘充分混勻。

10.在15分鐘內(nèi),，用酶標(biāo)儀450nm波長讀數(shù),。

9. 計算結(jié)果

-計算標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的平均吸光值；

-用計算得到的平均吸光值分別除以0標(biāo)準(zhǔn)品的吸光值并乘以100,；

標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度值（或樣品）

---------------------------- X100= (%)吸光度值

0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值 (Bo )

-以標(biāo)準(zhǔn)品濃度值（ng/ml）的半對數(shù)值為橫坐標(biāo),，B/B0值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；

-將樣本的B/B0值帶入校準(zhǔn)曲線,，得到相應(yīng)的濃度值(ppb),；

-由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度已經(jīng)考慮了樣本稀釋倍數(shù)，從標(biāo)準(zhǔn)曲線讀到的濃度值即為樣本中玉米赤霉烯酮的濃度,。

-如果應(yīng)用50-5000濃度范圍,，則結(jié)果為從標(biāo)準(zhǔn)曲線讀到的濃度值乘以稀釋倍數(shù)5.

10．樣品標(biāo)準(zhǔn)曲線示例

11.結(jié)果評價

計算出結(jié)果后，還需要驗證檢測效果,。通過將得到的結(jié)果和說明書提供的技術(shù)參數(shù)比較驗證,。如果結(jié)果與參數(shù)不符，請檢測試劑盒的有效期,、讀取吸光值使用的波長,、以及操作過程是否正確。如果不是操作錯誤,，請的,。

12.試劑盒參數(shù)

13．免責(zé)聲明

出現(xiàn)陽性結(jié)果時，必須用確證方法對樣本檢測,。TECNA公司不承擔(dān)任何因為使用者錯誤使用試劑盒造成的損失,。

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