*M1 ELISA檢測試劑盒
（貨號：MA440）

本試劑盒用于定量檢測牛奶樣本中*M1殘留,。

檢測樣本：原奶,、奶粉

樣本前處理：

-原奶：2-8°C冷藏，離心

-奶粉：稀釋

分析時間：75分鐘（不包括樣本前處理時間）

檢測限：

-原奶：0.005ppb

-奶粉：0.05ppb

特異性：交叉反應(yīng)率（%）

1. 檢測原理

本試劑盒在預(yù)包被特異性*M1抗體的微孔內(nèi)進(jìn)行,。將*M1標(biāo)準(zhǔn)品和樣本加入微孔,，*次孵育時,，自由的*M1分子和*M1抗體結(jié)合，洗板除掉所有未結(jié)合的物質(zhì),。加入*-HRP偶聯(lián)物進(jìn)行第二次孵育,，偶聯(lián)物封閉所有未*次孵育時未結(jié)合的抗體結(jié)合位點，然后加入一定量顯色底物反應(yīng)以檢測酶活性,。加終止液終止反應(yīng),，450nm波長酶標(biāo)儀檢測，標(biāo)準(zhǔn)品或樣品中的*M1濃度與吸收光強(qiáng)度成反比,。

2.試劑盒組成
微孔板：96孔,，預(yù)包被*M1抗體,。板條可拆開單獨使用,。

*M1標(biāo)準(zhǔn)溶液：7瓶，各1.5ml,，濃度分別為：0ppt,，5 ppt，10 ppt,，25 ppt,，50 ppt，100 ppt,，250 ppt,。

酶偶聯(lián)物：1瓶，250ul濃縮酶偶聯(lián)物,。

酶偶聯(lián)物稀釋液：1瓶,，20ml。

20X濃縮洗液：1瓶,，50ml,。

顯色液：1瓶，15ml,。

終止液：1瓶,，9ml。

3.需要使用但試劑盒不提供的試劑和設(shè)備
-蒸餾水

-離心機(jī),，是冷凍離心機(jī),。

-20-200μl、100-1000μl移液器及吸頭
-20-300μl多道移液器及吸頭
-含450nm波長的酶標(biāo)儀

4.注意事項
-僅用于體外檢測,。
-一些試劑內(nèi)含防腐劑,；終止液內(nèi)含有硫酸，具有腐蝕性,；酶偶聯(lián)物對身體有害,。
-小心操作,，避免試劑接觸皮膚、眼睛和粘膜,。
 

5.操作和存儲說明
-2-8°C冷藏保存,，切勿冷凍。
-將未用完的板條用試劑盒提供的鋁箔袋重新密封,。
-切勿使用過期產(chǎn)品,。
-不同批次試劑盒內(nèi)的成分不能混用。
-請使用試劑盒內(nèi)提供的說明書,。

6.樣本前處理步驟

6.1原奶

-必須在擠奶后24小時內(nèi)檢測,，否則必須用*或類似物做穩(wěn)定處理。

-2-8°C預(yù)冷樣本,，并將樣本在2-8°C,、離心力3000g離心10分鐘。

-分離除去脂肪,。

-所得脫脂奶直接用于檢測,。

-如果樣本中*M1濃度在10-500ppt范圍，用樣本稀釋液（MA444）將樣本2倍稀釋,，以使樣本的*M1濃度達(dá)到有效檢測范圍,。從標(biāo)準(zhǔn)曲線所讀值乘以稀釋倍數(shù)2為樣本中的zui終濃度值。

-如果樣本中*M1濃度在25-1250ppt范圍,，用樣本稀釋液（MA444）將樣本5倍稀釋,，以使樣本的*M1濃度達(dá)到有效范圍。從標(biāo)準(zhǔn)曲線所讀值乘以稀釋倍數(shù)5為樣本中的zui終濃度值,。

-如果樣本中*M1濃度在10-500ppt范圍,，用樣本稀釋液（MA444）將樣本10倍稀釋，以使樣本的*M1濃度達(dá)到有效范圍,。從標(biāo)準(zhǔn)曲線所讀值乘以稀釋倍數(shù)10為樣本中的zui終濃度值,。

6.2奶粉

-稱取10g奶粉，用蒸餾水定容至100ml,。

-搖晃直至奶粉*溶解,。樣本稀釋倍數(shù)為10.

7．工作溶液準(zhǔn)備

*M1標(biāo)準(zhǔn)品：即用（使用前輕搖混勻）；

酶偶聯(lián)物：注意,，為了收集到管內(nèi)所有酶偶聯(lián)物,，使用前低速離心數(shù)秒鐘。計算當(dāng)次實驗的需要量,，用酶稀釋液將濃縮酶偶聯(lián)物1/100稀釋（例如,，20ul濃縮酶偶聯(lián)物+1980ul酶稀釋液）。稀釋混勻過程不得劇烈震蕩,。每次吸取濃縮酶偶聯(lián)物的量不得少于20ul,。

洗液：用蒸餾水1：20稀釋（1+19）,。注意：如果出現(xiàn)結(jié)晶，將溶液置于室溫并攪拌直至結(jié)晶*溶解,。

稀釋后的洗液在室溫放置24小時內(nèi)有效,，2-8°C放置兩周內(nèi)有效。

顯色液：即用,。顯色液對光敏感,，應(yīng)避免光直射，避光保存,。

終止液：即用,。

酶稀釋液：即用

8.檢測步驟

8.1檢測前注意事項

-檢測前將所有試劑室溫放置1小時；

-使用后立即將所有試劑放置于2-8°C,；

-不得改變檢測程序,；

-不得延長或縮短孵育時間；

-孵育溫度不得高于25°C或低于18°C,；

-孵育過程中不得晃動酶標(biāo)板,；

-使用精準(zhǔn)的移液器及吸頭,；

-一旦開始實驗,，不要間斷地完成所有步驟，不要讓微孔干透,；

-ELISA方法結(jié)果的再現(xiàn)性很大程度取決于洗板過程的效率和*性,，要按照介紹的程序洗板；

-為避免交叉污染,，加不同樣品和標(biāo)準(zhǔn)品時要更換移液器吸頭,；

-不得讓吸頭接觸到微孔內(nèi)的液體或者微孔內(nèi)表面；

-孵育時要避免光直射,。建議孵育時用封板膜封板,。

8.2檢測步驟

1.計算需要用到的微孔數(shù)量，標(biāo)記zui大光吸收值孔,、標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔的位置,。注意要考慮到都要做重復(fù)。取出需要的板條,，并將未使用的板條重新用鋁箔袋密封,。準(zhǔn)備同等數(shù)量的預(yù)混合板條。

2.加入100ul各標(biāo)準(zhǔn)品/樣本到相應(yīng)微孔,，輕搖混勻后封板膜封板,。

3.室溫孵育45分鐘。不的延長次孵育時間,，不能使用自動振蕩器,。

4. 洗板

-孵育后,，倒掉孔內(nèi)液體；

-將微孔加滿工作濃度洗滌液,，然后倒掉洗滌液,；

-用力上下在吸水紙上拍板，將微孔內(nèi)液體*拍干,。

重復(fù)洗滌過程4次,。

在干凈的吸水紙上拍板，拍干微孔內(nèi)的液體,。但不可使微孔干透,。

5.用多道移液器，每孔加入100ul酶偶聯(lián)物溶液,。來回輕搖混勻并蓋封板膜,。

6.孵育15分鐘。

7.重復(fù)步驟4洗板,。

8.顯色：用多道移液器加100μl顯色液到微孔,，來回晃動數(shù)秒鐘。

9.室溫避光孵育15分鐘,。

10.用多道移液器加50μl終止液到各孔,。來回晃動數(shù)秒鐘充分混勻。

10.在1小時內(nèi),，用酶標(biāo)儀450nm波長讀數(shù),。

9. 計算結(jié)果

-計算標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的平均吸光值；

-用計算得到的平均吸光值分別除以0標(biāo)準(zhǔn)品的吸光值并乘以100,；

標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度值（或樣品）

---------------------------- X100= (%)吸光度值

0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值 (Bo )

-以標(biāo)準(zhǔn)品濃度值（ng/ml）的半對數(shù)值為橫坐標(biāo),，B/B0值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；

-將樣本的B/B0值帶入校準(zhǔn)曲線,，得到相應(yīng)的濃度值,；

-要得到樣本中*M1的濃度值，還需要將從校準(zhǔn)曲線讀到的濃度乘以相應(yīng)樣本的稀釋倍數(shù),。

10．樣品標(biāo)準(zhǔn)曲線示例

11.結(jié)果評價

計算出結(jié)果后,，還需要驗證檢測效果。通過將得到的結(jié)果和說明書提供的技術(shù)參數(shù)比較驗證,。如果結(jié)果與參數(shù)不符,，請檢測試劑盒的有效期、讀取吸光值使用的波長,、以及操作過程是否正確,。如果不是操作錯誤，請的,。

12.試劑盒參數(shù)

13．免責(zé)聲明

出現(xiàn)陽性結(jié)果時,，必須用確證方法對樣本檢測,。TECNA公司不承擔(dān)任何因為使用者錯誤使用試劑盒造成的損失。