大鼠纖維連結(jié)蛋白(FN)ELISA試劑盒

用途：定量檢測細(xì)胞液,、體液,、組織、血清,、血漿等標(biāo)本中 大鼠纖維連結(jié)蛋白(FN)ELISA試劑盒含量

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大鼠纖維連結(jié)蛋白(FN)ELISA試劑盒

操作方法：

一,、雙抗體夾心法

1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml,，4℃ ,。次日，棄去孔內(nèi)溶液,，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘,。（簡稱洗滌,，下同）。

2. 加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,，置37℃ 孵育1小時,。然后洗滌。（同時做空白孔,，陰性對照孔及陽性對照孔）,。

3. 加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml,。37℃ 孵育0.5～1小時,，洗滌。

4. 加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,，37℃ 10～30分鐘,。

5. 終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml,。

6. 結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,，陽性程度越強(qiáng),，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺,，以“+”,、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上,，于450nm（若以ABTS顯色,，則410nm）處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值,，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,，即為陽性。

二,、間接法

1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg/ml,，每孔加0.1ml，4℃,；

2.次日洗滌3次,；

3.加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時,洗滌；

4.（同時做空白,、陰性及陽性孔對照）于反應(yīng)孔中,，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體（抗抗體）0.1ml；

5.37℃孵育35-60分鐘,，洗滌,；

6.zui后一遍用DDW洗滌。

其余步驟同“雙抗體夾心法”的4,、5,、6。

大鼠纖維連結(jié)蛋白(FN)ELISA試劑盒

標(biāo)本收集: 血清：全血標(biāo)本于室溫放置2小時或4℃后于1000×g離心20分鐘,，取上清即可檢測,，收集血液的試管應(yīng)為一次性的無熱原，無內(nèi)毒素試管,。血漿：抗凝劑*使用EDTA,，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測,。避免使用溶血,，高血脂標(biāo)本。其它生物標(biāo)本：1000×g離心20分鐘,，取上清即可檢測標(biāo)本應(yīng)清澈透明,，懸浮物應(yīng)離心去除,。標(biāo)本收集后若不及時檢測，請按一次使用量分裝,，凍存于-20℃/-80℃電冰箱內(nèi),，避免反復(fù)凍融，6個月內(nèi)進(jìn)行檢測,4℃保存的應(yīng)在1周內(nèi)進(jìn)行檢測,。 如果樣本中檢測物濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品zui高值,，請根據(jù)實際情況，做適當(dāng)倍數(shù)稀釋(建議先做預(yù)實驗,，以確定稀釋倍數(shù)),。
酶標(biāo)儀(450nm波長濾光片)高精度移液器，EP管及一次性吸頭：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL,200-1000μL37℃恒溫箱, 雙蒸水或去離子水,。

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