大鼠纖維連結蛋白(FN)ELISA試劑盒

用途：定量檢測細胞液、體液,、組織,、血清、血漿等標本中 大鼠纖維連結蛋白(FN)ELISA試劑盒含量

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大鼠纖維連結蛋白(FN)ELISA試劑盒

操作方法：

一,、雙抗體夾心法

1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1～10μg/ml,。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml，4℃ ,。次日,，棄去孔內溶液，用洗滌緩沖液洗3次,，每次3分鐘,。（簡稱洗滌，下同）,。

2. 加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中,，置37℃ 孵育1小時。然后洗滌,。（同時做空白孔,，陰性對照孔及陽性對照孔）。

3. 加酶標抗體：于各反應孔中,，加入新鮮稀釋的酶標抗體（經滴定后的稀釋度）0.1ml,。37℃ 孵育0.5～1小時，洗滌,。

4. 加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,，37℃ 10～30分鐘。

5. 終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。

6. 結果判定：可于白色背景上,，直接用肉眼觀察結果：反應孔內顏色越深,，陽性程度越強,，陰性反應為無色或極淺,，依據所呈顏色的深淺，以“+”,、“-”號表示,。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色,，則410nm）處,，以空白對照孔調零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,，即為陽性,。

二、間接法

1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg/ml,，每孔加0.1ml,，4℃；

2.次日洗滌3次,；

3.加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌,；

4.（同時做空白、陰性及陽性孔對照）于反應孔中,，加入新鮮稀釋的酶標第二抗體（抗抗體）0.1ml,；

5.37℃孵育35-60分鐘，洗滌,；

6.zui后一遍用DDW洗滌,。

其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5,、6,。

大鼠纖維連結蛋白(FN)ELISA試劑盒

標本收集: 血清：全血標本于室溫放置2小時或4℃后于1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測,，收集血液的試管應為一次性的無熱原,，無內毒素試管。血漿：抗凝劑*使用EDTA,，標本采集后30分鐘內于1000×g離心15分鐘,，取上清即可檢測。避免使用溶血,，高血脂標本,。其它生物標本：1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測標本應清澈透明，懸浮物應離心去除,。標本收集后若不及時檢測,，請按一次使用量分裝，凍存于-20℃/-80℃電冰箱內,，避免反復凍融,，6個月內進行檢測,4℃保存的應在1周內進行檢測。 如果樣本中檢測物濃度高于標準品zui高值,，請根據實際情況,，做適當倍數稀釋(建議先做預實驗，以確定稀釋倍數),。
酶標儀(450nm波長濾光片)高精度移液器,，EP管及一次性吸頭：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL,200-1000μL37℃恒溫箱, 雙蒸水或去離子水。

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