QuantiTect Rev Transcription Kit逆轉(zhuǎn)錄試劑盒 （反轉(zhuǎn)錄試劑盒）

• cDNA合成和gDNA去除僅用20分鐘完成
• 有效去除基因組DNA，無需設計RNA特異性引物或探針
• 高特異性,，即便是低豐度的轉(zhuǎn)錄本也能獲得高產(chǎn)量的cDNA
• 轉(zhuǎn)錄本的5' 和3' 端區(qū)域都可以進行cDNA 合成

For 50 x 20 ul reactions: 100 ul 7x gDNA Wipeout Buffer, 50 ul Quantiscript Reverse Transcriptase, 200 ul 5x Quantiscript RT Buffer, 50 ul RT Primer Mix, 1.9 ml RNase-Free Water

逆轉(zhuǎn)錄試劑盒組分確保高效,、高靈敏的Real-Time RT-PCR

原理

為獲得準確的real-time RT-PCR基因表達分析結(jié)果,，很重要的是僅擴增和檢測cDNA,。基因組DNA的干擾可通過設計橫跨外顯子/外顯子邊界的引物或探針避免,。盡管如此,，在某些特殊情況下（如：cDNA來自一個單外顯子基因），起始RNA樣品必須無基因組DNA,。

使用QuantiTect Reverse Transcription Kit,，基因組DNA污染物可使用*的gDNA去除緩沖液迅速有效的去除（見圖：“高效去除基因組DNA，確保精確的Real-Time RT-PCR"）,。因為純化RNA樣品后無需另外采用DNA酶消化,，從而可節(jié)省時間和費用。并且也無需設計RNA特異性引物和探針,。

低豐度轉(zhuǎn)錄本獲得更高產(chǎn)量的cDNA

應用Real-time,，兩步法RT-PCR 分析IL12A 和IL1RN，起始RNA量不同 ,。應用QuantiTect Reverse Transcription Kit 或來自供應商Supplier A_II的試劑盒逆轉(zhuǎn)錄總 RNA ,。在 ABI PRISM 7900 上應用的QuantiTect Probe PCR Kit 、IL12A或 IL1RN的 QuantiTect Gene Expression Assays 分析合成的,。 應用凱杰試劑盒C_T值較低,，尤其中等豐度的基因IL12A（粗體），cDNA產(chǎn)量更高,。N.D.：未檢測（Not detected）,。

RT Primer Mix包含有特別優(yōu)化的oligo-dT和隨機引物的混合物，使cDNA合成可從RNA轉(zhuǎn)錄本的各個區(qū)域起始,，甚至可從5'區(qū)域開始（見圖：“高靈敏度檢測12.5 kb 轉(zhuǎn)錄本5'區(qū)域的靶分子"）,。相對于其他供應商提供的試劑盒來說，QuantiTect Reverse Transcription Kit為real-time PCR分析提供高產(chǎn)量的cDNA,，無需考慮待擴增目標序列位于轉(zhuǎn)錄本的哪個區(qū)域,。同時，QuantiTect Reverse Transcription Kit也確保了real-time RT-PCR結(jié)果更好的重復性,。

操作流程

使用QuantiTect逆轉(zhuǎn)錄試劑盒可在20分鐘內(nèi)去除基因組DNA和合成cDNA（見流程圖）,。由于兩個反應均在同一孵育溫度并使用預混液構(gòu)建反應，因此操作過程快速且方便,。相反,，供應商I提供的試劑盒操作需更多移液步驟且經(jīng)常需要調(diào)整孵育溫度，因此需要更長時間和更多手動操作,。

應用

QuantiTect Reverse Transcription Kit可從各種類型的起始樣品中合成cDNA以實現(xiàn)高效和高靈敏度的real-time RT-PCR,，包括激光顯微切割樣品和活組織切片樣品。與其他供應商提供的試劑相比,，QuantiTect Reverse Transcription Kit在檢測低豐度基因時具有更高的靈敏度（見圖：“Real-Time,，兩步法RT-PCR精確度更高"）。

為獲得高特異性和高靈敏度的real-time RT-PCR結(jié)果,，又避免耗時的反應步驟優(yōu)化過程,，我們*QuantiTect Reverse Transcription Kit和其他QuantiTect產(chǎn)品聯(lián)合使用。包括經(jīng)優(yōu)化的PCR反應預混液和即用型引物,，使用SYBR Green染料法或序列特異性探針法進行 real-time RT-PCR,。

Images

 高效去除基因組DNA，確保精確的Real-Time RT-PCR — A  高靈敏度檢測12.5 kb轉(zhuǎn)錄本5'區(qū)域的靶分子  快速方便的cDNA合成  高靈敏度的Real-Time,，兩步法RT-PCR