產(chǎn)品名稱：無內(nèi)毒素質(zhì)粒小量提取試劑盒
產(chǎn)品編號：D1140
規(guī)格：50T/100T 
保存：常溫干燥保存,，復(fù)檢期為一年,。
產(chǎn)品說明： 
  無內(nèi)毒素質(zhì)粒小量提取試劑盒采用堿裂解法裂解細胞，根據(jù)離心吸附柱在高鹽狀態(tài)下特異性地結(jié)合溶液中的 DNA 的原理特異性提取質(zhì)粒 DNA,。  離心吸附柱中采用的硅基質(zhì)材料能高效,、專一地吸附 DNA，可大限度去除雜質(zhì)蛋白及細胞中其他有機化合物。 Solarbio 公司研制的內(nèi)毒素清除劑,，可大限度地除去內(nèi)毒素,。從 1-5ml 大腸桿菌 L培養(yǎng)液中，可快速提取 5-15μg 高純度質(zhì)粒 DNA,，提取率達 85-90%,。使用盒提取的質(zhì)粒 DNA 純度高，可直接用于細胞轉(zhuǎn)染等要求較高的實驗,，以及其他各種常規(guī)操作,，包括酶切、PCR,、測序,、連接和轉(zhuǎn)化等試驗使用前請先在漂洗液中加入無水乙醇，加入體積請參照瓶體上的標(biāo)簽,。溶液P1在使用前先將試劑盒中提供盒操作步驟: 
1,、取1-5ml細菌培養(yǎng)物，12000rpm離心1min,，吸除上清（菌液濃度較低時可多次離心收集到一個離心管中） 。
2,、向留有菌體沉淀的離心管中加入200μl溶液P1(請先檢查是否已加入RNaseA） ,，使用移液器或旋渦振蕩器*懸浮細菌細胞沉淀。注意：如果菌塊未*混勻,，會影響裂解導(dǎo)致質(zhì)粒提取量和純度偏低,。 
3、向離心管中加入200ul溶液P2,，溫和地上下翻轉(zhuǎn)6-8次使菌體充分裂解,。注意：混勻一定要溫和，以免污染細菌基因組DNA,，此時菌液應(yīng)變得清亮粘稠,，作用時間不要超過5 min，以免質(zhì)粒受到破壞,。 
4,、 向離心管中加入200ul溶液P3， 立即溫和地上下翻轉(zhuǎn)6-8次,，充分混勻,，此時會出現(xiàn)白色絮狀沉淀。 12000rpm的RNaseA全部加入,，混勻,，置于 2-8℃保存。如非指明，所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心,。離心10 min,，用移液器小心地將上清轉(zhuǎn)移到另一個干凈的離心管中，盡量不要吸出沉淀,。注意：溶液P3加入后應(yīng)立即混合,，避免產(chǎn)生局部沉淀。如果上清中還有微小白色沉淀,，可再次離心后取上清,。 
5、加入上清1/5體積的冰上預(yù)冷的內(nèi)毒素清除劑,，振蕩混勻,，溶液變渾濁，冰浴2min至溶液變清亮,。 
6,、37℃水浴5min,不時振蕩，溶液又變渾濁,。12000rpm室溫離心5min,，溶液應(yīng)分為兩相，上層水相含質(zhì)粒DNA,，下層油相含內(nèi)毒素,。 
7、將含質(zhì)粒DNA的上層水相轉(zhuǎn)移至新管,，棄下層油相,，注意不要吸入油狀相。重復(fù)步驟5-7三次,。 
8,、加入600ul的結(jié)合液，充分混勻后加入吸附柱中,，室溫放置2min,，12000rpm離心1min，倒掉收集管中的廢液,，將吸附柱重新放回收集管中,。如果溶液量多可分多次加入。 
9,、向吸附柱中加入700ul漂洗液(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇),，12000rpm離心1min，棄廢液,，將吸附柱放入收集管中,。 
10,、向吸附柱中加入500ul漂洗液，12000rpm離心1min,，棄廢液,，將吸附柱放入收集管中。 
11,、12000rpm離心2min,，將吸附柱敞口置于室溫或50℃溫箱放置數(shù)分鐘，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除,，否則漂洗液中的乙醇會影響后續(xù)的實驗如酶切,、PCR等。 
12,、將吸附柱放入一個干凈的離心管中,，向吸附膜*懸空滴加50-200ul經(jīng)65℃水浴預(yù)熱的洗脫液，室溫放置2min,，12000rpm離心1min,。 
13、為了增加質(zhì)粒的回收效率,，可將得到的洗脫液重新加入吸附柱中,，室溫放置2min，12000rpm離心1min,。 
盒注意事項: 
1.  使用前請先檢查溶液 P2,、P3 和結(jié)合液是否出現(xiàn)混濁，如有混濁現(xiàn)象,，可在 37℃水浴中加熱幾分鐘，待溶液恢復(fù)澄清后再使用,。 
2.  洗脫緩沖液體積不應(yīng)少于 50ul,，體積過小影響回收效率；洗脫液的 pH值對洗脫效率也有影晌,，若需要用水做洗脫液應(yīng)保證其 pH值在 8.0 左右(可用 NaOH 將水的 pH值調(diào)至此范圍),， pH值低于 7. 0 會降低洗脫效率。DNA產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃,，以防 DNA 降解,。 
3.  質(zhì)粒DNA濃度＞1mg/ml時清除內(nèi)毒素效率降低。由于質(zhì)粒DNA本身的性質(zhì),，清除過程可導(dǎo)致部分質(zhì)粒DN丟失,，但內(nèi)毒素卻能得到大限度清除。 
4.  所有溶液應(yīng)用無內(nèi)毒素的高純水配制,，所有器械材料均應(yīng)不含內(nèi)毒素,，玻璃器皿可高溫烘烤，非揮發(fā)性水溶液可高壓處理。 
5. DNA濃度及純度檢測：得到的質(zhì)粒DNA純度與樣品保存時間,、操作過程中的剪切力等因素有關(guān),。  得到的DN可用瓊脂糖疑膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。 DNA應(yīng)在OD260處有顯著吸收峰,，OD260值為 1 相當(dāng)于大約 50μg/ml雙鏈DNA,、 40μg/ml單鏈DNA。OD260/OD280比值應(yīng)為 1.7-1.9,，如果洗脫時不使用洗脫緩沖液,，而使用去離子水，比值會偏低,，因為pH值和離子存在會影響吸光值,，但并不表示純度低。  
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