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Anti-Caveolin-1抗體,細(xì)胞質(zhì)膜微囊蛋白-1抗體

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【產(chǎn)品編號】:BYK-1453R

【產(chǎn)品規(guī)格】:0.1ml/0.2ml

【產(chǎn)品價格】:詢價(電詢 客服:)

【抗體來源】:Rabbit OR Mouse

【產(chǎn)品用途】:科研實(shí)驗,,用于免疫組化實(shí)驗,WB實(shí)驗,,相應(yīng)的標(biāo)記抗體有HRP標(biāo)記抗體,,F(xiàn)ITC標(biāo)記,BIO等,。
【性 狀】: Lyophilized or Liquid
【濃 度】: 1mg/1ml
【亞 型】: IgG

【貯 存】: 貯存于-20℃.

Anti-Caveolin-1抗體,細(xì)胞質(zhì)膜微囊蛋白-1抗體應(yīng)用于WB實(shí)驗蛋白提樣品制備步驟:
1,、 將培養(yǎng)液吸入至15 ml離心管中,于2500 rpm離心5 min,。
2,、 棄上清,加入5 ml PBS并用槍輕輕吹打洗滌,,然后2500 rpm離心5 min,。棄上清后用PBS重復(fù)洗滌一次。
3,、 用槍吸干上清后,加100 μl裂解液(含PMSF)冰上裂解30 min,,裂解過程中要經(jīng)常彈一彈以使細(xì)胞充分裂解,。
4、將裂解液4℃,、12000 rpm離心5 min,,取上清分裝于0.5 ml EP管中并置于-20℃保存。
5,、BCA法測蛋白濃度
SDS-PAGE電泳
1,、 玻璃板對齊后放入夾中卡緊,然后垂直卡在架子上準(zhǔn)備灌膠。
2,、按前面方法配10%分離膠,,加入TEMED后立即搖勻即可灌膠。灌膠時,,可用10 ml槍吸取5 ml膠沿玻璃放出,,待膠面升到綠帶中間線高度時即可。然后膠上加一層水,,液封后的膠凝的更快,。(灌膠時開始可快一些,膠面快到所需高度時要放慢速度,。操作時膠一定要沿玻璃板流下,,這樣膠中才不會有氣泡。加水液封時要慢,,否則膠會被沖變型,。)
3、 當(dāng)水和膠之間有一條折射線時,,說明膠已凝了,。再等3 min使膠充分凝固就可倒去膠上層水并用吸水紙將水吸干。
4,、 按方法配4%的濃縮膠,加入TEMED后立即搖勻即可灌膠,。將剩余空間灌滿濃縮膠后將梳子插入孔槽。灌膠時也要使膠沿玻璃板流下以免膠中有氣泡產(chǎn)生,。插梳子時要使梳子保持水平,。待到濃縮膠凝固后,兩手分別捏住梳子的兩邊豎直向上輕輕將其拔出,。
5,、 用水沖洗濃縮膠,將其放入電泳槽中,。
6,、 測完蛋白含量后,計算含20-50 μg蛋白(根據(jù)自己的實(shí)驗需要進(jìn)行選擇,,沒有固定的量)的溶液體積即為上樣量,。取出上樣樣品至200 μl的EP管中,加入5×SDS 上樣緩沖液至終濃度為1×,。上樣前要將樣品于沸水中煮5-10 min使蛋白變性,。
7、 加入足夠的電泳緩沖液后開始準(zhǔn)備上樣,。(電泳液至少要漫過內(nèi)測的小玻璃板,。)用微量進(jìn)樣器貼壁吸取樣品,將樣品吸出不要吸進(jìn)氣泡,。將加樣器針頭插至加樣孔中緩慢加入樣品(包括一孔做可視的蛋白marker),。(加樣太快可使樣品沖出加樣孔,若有氣泡也可能使樣品溢出,。加入下一個樣品時,,進(jìn)樣器需在外槽電泳緩沖液中洗滌數(shù)次,以免交叉污染)
8,、電泳:濃縮膠時用80-100 V跑,,到分離膠以后用150-200 V跑,總時間2 h左右,,電泳至溴酚蘭剛跑出即可終止電泳,,進(jìn)行轉(zhuǎn)膜。

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