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2025年3月21日14:00，化工儀器網(wǎng)特舉辦“第三屆[詳細(xì)]
藥品質(zhì)量檢測(cè)方法：薄層色譜法
2022年08月24日 11:53:39
來(lái)源：化工儀器網(wǎng) 作者：小王 點(diǎn)擊量：8456
薄層色譜法是一種以涂布于支持板上的支持物作為固定相，以合適的溶劑為流動(dòng)相,，對(duì)混合樣品進(jìn)行分離,、鑒定和定量的層析分離技術(shù)，能夠快速分離諸如脂肪酸,、類固醇,、氨基酸、核苷酸,、生物堿及其他多種物質(zhì),，因此自50年代發(fā)展起來(lái)之后，一直被應(yīng)用在生物研究,、藥物研究,、環(huán)境化學(xué)等多個(gè)領(lǐng)域。
【化工儀器網(wǎng) 行業(yè)百態(tài)】薄層色譜法是一種以涂布于支持板上的支持物作為固定相,，以合適的溶劑為流動(dòng)相,，對(duì)混合樣品進(jìn)行分離、鑒定和定量的層析分離技術(shù),，能夠快速分離諸如脂肪酸,、類固醇、氨基酸,、核苷酸,、生物堿及其他多種物質(zhì)，因此自50年代發(fā)展起來(lái)之后,，一直被應(yīng)用在生物研究,、藥物研究、環(huán)境化學(xué)等多個(gè)領(lǐng)域,。
從技術(shù)本身優(yōu)勢(shì)來(lái)說(shuō),，薄層色譜法對(duì)被分離物質(zhì)的性質(zhì)沒(méi)有限制，因此使用范圍較廣。并且平面薄層具有多路柱效應(yīng),，因此理論上可以進(jìn)行多個(gè)樣品的分離,。與此同時(shí)，得力于現(xiàn)代技術(shù)以及相關(guān)儀器的進(jìn)步,，在儀器化,、自動(dòng)化的今天，薄層色譜的分辨率及重現(xiàn)性也得到了了顯著提升,。
準(zhǔn)備工作
薄層色譜法需要要準(zhǔn)備薄層板(按支持物的材質(zhì)分為玻璃板,、塑料板或鋁板等；按固定相種類分為硅膠薄層板,、鍵合硅膠板,、微晶纖維素薄層板、聚酰胺薄層板,、氧化鋁薄層板等,；按固定相粒徑大小分為10~40µm普通薄層板和5~10µm高效薄層板)、點(diǎn)樣器(一般釆用微升毛細(xì)管或手動(dòng),、半自動(dòng),、全自動(dòng)點(diǎn)樣器材)、展開(kāi)容器(上行展開(kāi)一般用適合薄層板大小的專用平底或雙槽展開(kāi)缸,，展開(kāi)時(shí)須能密閉；水平展開(kāi)用專用的水平展開(kāi)槽),、顯色裝置,、檢視裝置。
薄層板制備
需要注意的是,，市售薄層板與自制薄層板的準(zhǔn)備工作并不相同,。市售薄層板臨用前一般應(yīng)在 110℃ 活化 30 分鐘(聚酰胺薄膜不需活化)。如在存放期間被空氣中雜質(zhì)污染,，使用前可以用三氯甲烷,、甲醇或二者的混合溶劑在展開(kāi)缸中上行展開(kāi)預(yù)洗、晾干后,，再進(jìn)行活化,，并置干燥器中備用。其中,，鋁基片薄層板,、塑料薄層板可根據(jù)需要剪裁，但須注意剪裁后的薄層板底邊的固定相層不得有破損,。
而自制薄層板操作就較為復(fù)雜了,。除另有規(guī)定外，首先將 1 份固定相和 3 份水(或加有黏合劑的水溶液，如 0.2%~0.5%羥甲基纖維素鈉水溶液,，或?yàn)橐?guī)定濃度的改性劑溶液)在研缽中按同一方向研磨混合,，去除表面的氣泡后，倒入涂布器中,。然后,，在玻板上平穩(wěn)地移動(dòng)涂布器進(jìn)行涂布(厚度為 0.2~0.3mm)，完成后取下涂好薄層的玻板,，置水平臺(tái)上于室溫下晾干后,，在 110℃ 烘 30 分鐘，隨即置于有干燥劑的干燥箱中備用,。需要注意的是,，自制薄層板使用前需檢查其均勻度，方法是在反射光及透視光下檢視,，確保表面應(yīng)均勻,、平整、光滑,，并且無(wú)麻點(diǎn),、無(wú)氣泡、無(wú)破損及污染,。
點(diǎn)樣與展開(kāi)
點(diǎn)樣無(wú)特殊規(guī)定需在潔凈干燥的環(huán)境中進(jìn)行,，用點(diǎn)樣器點(diǎn)樣于薄層板上。一般為圓點(diǎn)狀或窄細(xì)的條帶狀,，點(diǎn)樣基線距底邊 10~15mm,，高效板一般基線離底邊 8~10mm。圓點(diǎn)狀直徑一般不大于 4mm,，高效板一般不大于 2mm,。接觸點(diǎn)樣時(shí)注意勿損傷薄層表面。條帶狀寬度一般為 5~10mm,，高效板條帶寬度一般為 4~8mm,，可用專用半自動(dòng)或自動(dòng)點(diǎn)樣器械噴霧法點(diǎn)樣。點(diǎn)間距離可視斑點(diǎn)擴(kuò)散情況以相鄰斑點(diǎn)互不干擾為宜,，一般不少于 8mm,，高效板供試品間隔不少于 5mm。
之后將點(diǎn)好供試品的薄層板放入展開(kāi)缸中,，浸入展開(kāi)劑的深度為距原點(diǎn) 5mm 為宜,，密閉保存，待溶劑前沿達(dá)到規(guī)定的展距,，取出薄層板并晾干,。需要注意的是,，展開(kāi)前如需要溶劑蒸氣預(yù)平衡，可在展開(kāi)缸中加入適量的展開(kāi)劑后密閉,，一般保持 15~30 分鐘即可,。當(dāng)溶劑蒸氣預(yù)平衡后，應(yīng)迅速放入載有供試品的薄層板并立即密閉,。如需使展開(kāi)缸達(dá)到溶劑蒸氣飽和的狀態(tài),，則須在展開(kāi)缸的內(nèi)壁貼與展開(kāi)缸高、寬同樣大小的濾紙,，一端浸入展開(kāi)劑中,，密閉一定時(shí)間，使溶劑蒸氣達(dá)到飽和再如法展開(kāi),。
顯色與檢視
一般情況下,，有顏色的物質(zhì)可以再在可見(jiàn)光環(huán)境下直接檢視，無(wú)色物質(zhì)則需先進(jìn)行顯色,。顯色依據(jù)物質(zhì)不同采取的方法也不同,，一般采用噴霧法或浸漬法佐以顯色劑或者直接通過(guò)加熱顯色來(lái)實(shí)現(xiàn)。另外,，如果物質(zhì)帶有熒光或顯色后可激發(fā)產(chǎn)生熒光,，可以借助紫外光燈(365nm 或 254nm)來(lái)完成熒光斑點(diǎn)觀察的工作，對(duì)于在紫外光下有吸收的成分,，可用帶有熒光劑的薄層板(如硅膠 GF254 板),，在紫外光燈(254nm)下觀察熒光板面上的熒光物質(zhì)淬滅形成的斑點(diǎn)。
系統(tǒng)適用性試驗(yàn)
按各品種項(xiàng)下要求對(duì)實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行系統(tǒng)適用性試驗(yàn),，即用供試品和標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)對(duì)實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行試驗(yàn)和調(diào)整,，應(yīng)符合規(guī)定的要求。
鑒別
鑒別的過(guò)程一般通過(guò)對(duì)比供試品色譜圖中所顯斑點(diǎn)的位置和顏色(或熒光)與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)色譜圖的斑點(diǎn)一致性來(lái)實(shí)現(xiàn),，必要時(shí)化學(xué)藥品可采用供試品溶液與標(biāo)準(zhǔn)溶液混合點(diǎn)樣、展開(kāi),，與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)相應(yīng)斑點(diǎn)應(yīng)為單一,、緊密斑點(diǎn)。除此之外,，還可以通過(guò)薄層色譜掃描儀進(jìn)行掃描來(lái)實(shí)現(xiàn)鑒別,、檢查或含量測(cè)定的工作。具體來(lái)說(shuō)即用一定波長(zhǎng)的光照射在薄層板上,，對(duì)薄層色譜中可吸收紫外光或可見(jiàn)光的斑點(diǎn),，或經(jīng)激發(fā)后能發(fā)射出熒光的斑點(diǎn)進(jìn)行掃描，然后將掃描得到的圖譜及積分?jǐn)?shù)據(jù)用于鑒別,、檢查或含量測(cè)定,。
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