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《肌動蛋白抗體測定免疫印跡法》意見征求
2020年04月13日 10:05:51 來源:化工儀器網(wǎng) 點擊量:5593

閱讀標(biāo)準(zhǔn)征求意見稿后可知,,《肌動蛋白抗體測定免疫印跡法》引用了GB/T6682《分析實驗室用水規(guī)格和實驗方法》,規(guī)定了基于免疫印跡法的肌動蛋白抗體表現(xiàn)分子量測定,、效價驗證、物種反應(yīng)以及穩(wěn)定性試驗,。

  【化工儀器網(wǎng) 政策標(biāo)準(zhǔn)】有研究表明,肌動蛋白可以進入循環(huán)系統(tǒng)如血液,、腦脊液及其他生物體液,,如淋巴液、尿液,、支氣管肺泡灌洗液中,,不僅可以作為細(xì)胞損傷的標(biāo)志物,而且可能有直接的致死效應(yīng)。而F-肌動蛋白可作為一種自身抗原,,參與自身免疫性疾病的發(fā)生發(fā)展,,疾病相關(guān)抗肌動蛋白抗體也可作為多種疾病的預(yù)后生物標(biāo)志物,為疾病診斷提供可信賴的依據(jù),。
 
  進一步研究肌動蛋白在細(xì)胞外的存在形式及其在生理與病理反應(yīng)過程中的作用,,不僅僅對基礎(chǔ)醫(yī)學(xué),更是對許多重大疾病的診斷,、預(yù)防及治療有重要意義,。為此,中國測試技術(shù)研究院,、正能生物,、中國測試技術(shù)研究院生物研究所、青島科技大學(xué)等單位在國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會的主管下,,起草編制了《肌動蛋白抗體測定免疫印跡法》,。日前,該標(biāo)準(zhǔn)已經(jīng)編制完成,,如今正面向社會征求意見,。意見征求時間截止至2020年6月8日。
 
  閱讀標(biāo)準(zhǔn)征求意見稿后可知,,《肌動蛋白抗體測定免疫印跡法》引用了GB/T6682《分析實驗室用水規(guī)格和實驗方法》,,規(guī)定了基于免疫印跡法的肌動蛋白抗體表現(xiàn)分子量測定、效價驗證,、物種反應(yīng)以及穩(wěn)定性試驗,。
 
  據(jù)悉,免疫印跡法原理是SDS與蛋白質(zhì)分子結(jié)合形成帶負(fù)電荷的蛋白質(zhì)SDS復(fù)合物,。在電場的作用下,,蛋白質(zhì)SDS復(fù)合物向帶有異向電荷的電極移動。根據(jù)聚丙烯酸胺凝膠分子篩效應(yīng),,復(fù)合物遷移速度與其分子量成負(fù)相關(guān),。將電泳分離的組分轉(zhuǎn)移并固定在化學(xué)合成膜等固相載體后,以特定的免疫反應(yīng)以及顯色系統(tǒng)分析印跡。
 
  免疫印跡法需要的儀器設(shè)備有電子天平,、垂直凝膠系統(tǒng),、轉(zhuǎn)移系統(tǒng)、電泳儀,、離心機,、均質(zhì)器、硝酸纖維膜,、旋渦振蕩器,、掃描儀和離心管。該方法的步驟如下:稱取1mg蛋白粉末加入1mL蒸餾水中溶解,,使母液濃度為1mg/mL,;將長滿CHO細(xì)胞的培養(yǎng)瓶放置在冰上,用吸液管吸出培養(yǎng)液,,加入足夠的冷的PBS在培養(yǎng)瓶中充分洗滌細(xì)胞表面,;向培養(yǎng)瓶中加入冷的NP-40裂解液,然后用細(xì)胞刮子沿著瓶壁開始刮細(xì)胞,;重復(fù)第一個步驟以盡可能多的收集到細(xì)胞裂解液到離心管中,;取出少量細(xì)胞裂解液測定蛋白濃度分裝保存在-70℃;電泳至溴酚藍到達分離膠底部,;后對其進行印跡,、免疫反應(yīng),。
 
  我國現(xiàn)行的法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)中,,沒有關(guān)于肌動蛋白抗體測定免疫印跡法的標(biāo)準(zhǔn),而本標(biāo)準(zhǔn)填補了肌動蛋白抗體測定免疫印跡法檢測指導(dǎo)文件,、技術(shù)操作細(xì)節(jié)的缺失,,相信本標(biāo)準(zhǔn)能對肌動蛋白抗體測定免疫印跡法檢測提供更為準(zhǔn)確、快速,、規(guī)范的法則以提高檢測工作效率和降低檢測成本,。
 
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