雞分泌型免疫球蛋白A（sIgA）酶聯(lián)免疫分析（ELISA）

試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用,。

藥品名稱：

通用名：雞分泌型免疫球蛋白A（sIgA）酶聯(lián)免疫分析試劑盒

使用目的：

本試劑盒用于測定雞血清,、血漿,、或其它組織液中分泌型免疫球蛋白A（sIgA）的含量,。

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中雞分泌型免疫球蛋白A（sIgA）水平,。用純化的抗-雞sIgA抗體包被微孔板,，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入sIgA,，再與HRP標記的羊抗雞抗體結合,，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的分泌型免疫球蛋白A（sIgA）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值）,，通過標準曲線計算樣品中雞分泌型免疫球蛋白A（sIgA）濃度,。

試劑盒組成

標本要求

1．標本處理：（1）血清或血漿：可直接用于檢測

            （2）組織：選取新鮮的組織，取2g組織用剪刀剪成小碎塊（2～5mm大?。?。然后將組織碎塊加入10mL離心管，加入2mL樣品生理鹽水,,，室溫下孵育5小時（期間不時旋渦混合）后勻漿,，2500轉/分離心10分鐘，取1ml上清液備用,，待測,。

            （3）培養(yǎng)物：向培養(yǎng)物中加入2ml生理鹽水，室溫孵育1小時（期間不時旋渦混合）后2500轉/分離心10分鐘,，取上清待測,。

（4）按相關文獻提取后，取上清液待測

3．不能檢測含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。

4．可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融,。

操作步驟

1.         標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10孔,，在*、第二孔中分別加標準品100μl,，然后在*,、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻,；然后從*孔,、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三,、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,，再各取50μl分別加到第五,、第六孔中，再在第五,、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七,、第八孔中,，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,，混勻后從第七,、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉,。（稀釋后各孔加樣量都為50μl,，濃度分別為（1800ng/L ，1200ng/L ,，600ng/L,，300ng/L ， 150ng/L）,。

2.         加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同）、待測樣品孔,。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，輕輕晃動混勻,。

3.         溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  

4.         配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用

5.         洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去,，如此重復5次，拍干,。

6.         加酶：每孔加入酶標試劑50μl,，空白孔除外。

7.         溫育：操作同3,。

8.         洗滌：操作同5,。

9.         顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15分鐘.

10.     終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11.     測定：以空白空調(diào)零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

計算

  以標準物的濃度為橫坐標,，OD值為縱坐標,，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式,，計算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度,。

注意事項

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存,。

2．濃洗滌液可能會有結晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果,。

3．各步加樣均應使用加樣器,，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差,。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣,。

4．  請每次測定的同時做標準曲線,，做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值）,，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定,，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。

5．  嚴格按說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準

6．底物請避光保存。封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染。

7．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

8．本試劑不同批號組分不得混用,。

9. 如與英文說明書有異,，以英文說明書為準,。

檢測范圍：

100ng/L – 2000ng/L

規(guī)格：

96人份/盒

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃,。

2．有效期：6個月

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