兔抗環(huán)瓜氨酸肽抗體(抗ccP)ELISA試劑盒

上海裕平生物主要經(jīng)營(yíng)ELISA試劑盒

試劑盒組成：

樣本處理及要求：

1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清,，保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心,。

2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清,，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心,。

3. 尿液：用無(wú)菌管收集,，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,，保存過(guò)程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心。胸腹水,、腦脊液參照實(shí)行,。

4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),，用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融,，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,。保存過(guò)程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心。

5. 組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后,，稱(chēng)取重量,。加入一定量的PBS,，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),，用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,。分裝后一份待檢測(cè),，其余冷凍備用。

6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),，可將標(biāo)本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.

7. 不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性,。

操作步驟：

1.         編號(hào)：將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),，每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照2孔、陽(yáng)性對(duì)照2孔,、空白對(duì)照1孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,，其余各步操作相同)

2.         加樣：分別在陰、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照,、陽(yáng)性對(duì)照50μl,。然后在待測(cè)樣品孔先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻,，

3.         溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。  

4.         配液：將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液加蒸餾水至600ml后備用

5.         洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置30秒后棄去,，如此重復(fù)5次,，拍干。

6.         加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,，空白孔除外,。

7.         溫育：操作同3,。

8.         洗滌：操作同5。

9.         顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl,，再加入顯色劑B 50μl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘

10.     終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色),。

11.     測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值),。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行,。

結(jié)果判定：

  試驗(yàn)有效性：陽(yáng)性對(duì)照孔平均值≥1.00; 陰性對(duì)照平均值≤0.10

  臨界值(CUT OFF)計(jì)算：臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15

  陰性判定：樣品OD值< 臨界值(CUT OFF)者為犬腺病毒抗體(ADV-Ab)陰性

  陽(yáng)性判定：樣品OD值≥ 臨界值(CUT OFF)者為犬腺病毒抗體(ADV-Ab)陽(yáng)性

注意事項(xiàng)

1．操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，本試劑不同批號(hào)組分不得混用,。

2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。

3．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果,。

4．  封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染。

5．底物請(qǐng)避光保存,。

6．試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),，使用雙波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí)，參考波長(zhǎng)為630nm

7．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。終止液為2M的*，使用時(shí)必須注意安全,。

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：,；2-8℃。

2．有效期：6個(gè)月

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