大鼠苗條素受體(LROb-R)ELISA試劑盒實驗使用說明書

　　BS-2971 大鼠苗條素受體(LR/Ob-R)ELISA試劑盒

　　一,、試劑盒簡介

　　大鼠苗條素受體(LR/Ob-R)ELISA試劑盒是一種基于雙抗體夾心法原理設(shè)計的酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒，用于定量測定大鼠血清,、血漿,、細胞培養(yǎng)上清液及相關(guān)液體樣本中苗條素受體的含量?。該試劑盒通過特異性抗體捕獲目標(biāo)抗原，再與酶標(biāo)記抗體結(jié)合形成復(fù)合物,，最終通過顯色反應(yīng)進行定量分析?,。

　　二、實驗原理

　　本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法：

　　將純化的大鼠苗條素受體抗體包被于微孔板,，形成固相抗體

　　加入樣本或標(biāo)準(zhǔn)品,，其中的LR/Ob-R與固相抗體結(jié)合

　　加入HRP標(biāo)記的LR/Ob-R抗體，形成"抗體-抗原-酶標(biāo)抗體"復(fù)合物

　　洗滌后加入TMB底物顯色,，在HRP酶催化下產(chǎn)生藍色產(chǎn)物,，酸作用下轉(zhuǎn)為黃色

　　顏色的深淺與樣品中LR/Ob-R濃度呈正相關(guān)，450nm波長下測定OD值?

　　三,、試劑盒組成

　　試劑盒通常包含以下組分(48T/96T兩種規(guī)格)：

　　微孔酶標(biāo)板?：8孔×6條(48T)或8孔×12條(96T),，預(yù)包被抗體?

　　標(biāo)準(zhǔn)品?：濃度通常為2700ng/L或72ng/L(不同批次可能有差異)，0.3mL-0.5mL×6管?

　　檢測抗體-HRP?：5mL(48T)/10mL(96T)?

　　樣本稀釋液?：3mL(48T)/6mL(96T)?

　　20×洗滌緩沖液?：15mL(48T)/25mL(96T),，使用前需稀釋?

　　顯色劑?：A液和B液各3mL(48T)/6mL(96T)?

　　終止液?：3mL(48T)/6mL(96T)?

　　封板膜?：2張?

　　說明書?：1份?

　　四,、樣本采集與處理

　　1. 樣本類型

　　適用于血清、血漿,、細胞培養(yǎng)上清液,、組織勻漿、尿液,、胸腹水,、腦脊液等?

　　2. 樣本處理方法

　　血清?：全血室溫放置2小時或4℃過夜后，1000g離心20分鐘取上清?

　　血漿?：EDTA或肝素抗凝,，采集后30分鐘內(nèi)2-8℃ 1000g離心20分鐘?

　　細胞培養(yǎng)上清?：1000g離心20分鐘取上清?

　　組織勻漿?：用PBS(pH7.2-7.4)制備10%勻漿，10000g離心5分鐘取上清?

　　3. 樣本保存

　　短期(48小時內(nèi))可2-8℃保存

　　長期應(yīng)分裝后-20℃保存,，避免反復(fù)凍融?

　　溶血樣本不宜檢測?

　　五,、實驗步驟

　　試劑準(zhǔn)備?：

　　從冰箱取出試劑盒，室溫平衡30分鐘?

　　配制洗滌液：將20mL濃洗滌液加蒸餾水稀釋至600mL(30倍)?

　　標(biāo)準(zhǔn)品稀釋：按說明書梯度稀釋(通常設(shè)5-7個濃度點)?

　　加樣?：

　　設(shè)空白孔(僅加樣本稀釋液),、標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔

　　分別加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品或處理好的樣本?

　　孵育?：

　　37℃孵育90分鐘?

　　棄去液體,，拍干，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去,，重復(fù)5次?

　　加酶標(biāo)試劑?：

　　每孔加入100μL HRP標(biāo)記抗體(空白孔加稀釋液)

　　37℃孵育60分鐘?

　　同上洗滌5次?

　　顯色?：

　　每孔加入50μL顯色劑A，再加50μL顯色劑B

　　37℃避光顯色15-30分鐘?

　　終止與測定?：

　　每孔加入50μL終止液

　　15分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm波長測定OD值?

　　六,、結(jié)果計算

　　以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo),，OD值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線?

　　根據(jù)樣本OD值,，從標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)濃度?

　　若樣本稀釋過,，需乘以稀釋倍數(shù)?

　　也可用回歸方程計算：將OD值代入方程Y=aX+b，求出X值?

　　七、注意事項

　　試劑保存?：

　　未開封試劑盒2-8℃保存,，有效期內(nèi)使用?

　　開封后未用完板條應(yīng)立即密封,，加干燥劑保存?

　　操作規(guī)范?：

　　不同批次試劑不可混用?

　　使用一次性吸頭避免交叉污染?

　　避免顯色劑接觸金屬器械?

　　洗滌要充分，拍干時避免吸水紙直接接觸孔內(nèi)?

　　質(zhì)量控制?：

　　建議標(biāo)準(zhǔn)品和樣本做雙復(fù)孔?

　　顯色過淺可適當(dāng)延長溫育時間?

　　若OD值超出標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍,，應(yīng)調(diào)整樣本稀釋比例重新測定?

　　儀器要求?：

　　使用精確的移液器(0.5-10μL, 20-200μL, 200-1000μL)?

　　酶標(biāo)儀需提前預(yù)熱并校準(zhǔn)?

　　八,、技術(shù)參數(shù)

　　檢測范圍?：通常為15-1000ng/L(不同品牌可能有差異)?

　　靈敏度?：通常5[6

　　精密度?：

　　板內(nèi)變異系數(shù)<10%

　　注：以上資料僅供參考，不作為實驗依據(jù),，具體產(chǎn)品說明請咨詢技術(shù)老師或品牌供應(yīng)商,。

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