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　　?大鼠骨鈣素/骨谷氨酸蛋白(OT/BGP)ELISA試劑盒實驗使用說明書主要包括試劑的保存、試劑的準備,、操作流程及注意事項等部分?,。

　　試劑的保存

　　試劑盒應(yīng)保存在-20℃(較長時間不用時)或2-8℃(頻繁使用時)?。

　　濃洗滌液低溫保存時可能會有鹽析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶?,。

　　試劑的準備

　　試劑應(yīng)按說明儲存，用前恢復到室溫。稀釋后的標準品應(yīng)丟棄,，不可保存?3,。

　　使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A,、B液時,，避免使用帶金屬部分的加樣器?。

　　用干凈的塑料容器配置洗滌液,，用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品?,。

　　操作流程

　　待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl，每種樣品設(shè)3個平行孔;設(shè)兩個陰性對照孔,，每孔加未處理組的細胞裂解液100μl;另設(shè)一個空白對照孔,，加入純細胞裂解液100μl?。

　　酶標板置4℃,，包被過夜?1,。

　　洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液洗滌3-4次?,。

　　陰性對照孔每孔加入PBS 50μl,，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的抗體工作液50μl(具體抗體根據(jù)實驗需求選擇)?。

　　酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),，孵育60min?,。

　　再次洗板?。

　　加入底物,，反應(yīng)后加終止液,，用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，通過標準曲線計算樣品中大鼠骨鈣素/骨谷氨酸蛋白(OT/BGP)濃度?,。

　　注意事項

　　實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,，密封保存，以免變質(zhì)?,。

　　不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好,，保質(zhì)前使用。不同批號的試劑不要混用?3,。

　　洗滌酶標板時應(yīng)充分拍干,，不要將吸水紙直接放入酶標反應(yīng)孔中吸水?。

　　底物A易揮發(fā),，避免長時間打開蓋子;底物B對光敏感,，避免長時間暴露于光下，且有毒,，實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值?,。

　　加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣?。

　　請嚴格按照說明書操作,，以確保實驗結(jié)果的準確性,。