小鼠膠原酶Ⅲ（Collagenase Ⅲ）定量檢測試劑盒（ELISA）

使用說明書

【試劑盒名稱】

小鼠膠原酶Ⅲ（Collagenase Ⅲ）定量檢測試劑盒（ELISA）

【試劑盒用途】

定量檢測小鼠血清,、血漿及相關液體樣本中膠原酶Ⅲ （Collagenase Ⅲ）的含量,。

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【檢測原理】

本試劑盒采用雙抗體一步夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）,。將標準品、待測樣本和酶標工作液加入到預先包被小鼠膠原酶Ⅲ （Collagenase Ⅲ ）抗體的透明酶標包被板中,，溫育足夠時間后,，洗滌除去未結合的成分。依次加入顯色劑A,、B液,，顯色劑（TMB）在辣根過氧化物酶（HRP）催化下轉化為藍色產物，在酸的作用下變成黃色,，顏色的深淺與樣品中小鼠膠原酶Ⅲ（Collagenase Ⅲ）濃度呈正相關,，450nm波長下測定OD值，根據標準品和樣品的OD值,，計算樣本中小鼠膠原酶Ⅲ（Collagenase Ⅲ）含量,。

【試劑盒組成】

備注：標準品用標準品稀釋液依次稀釋為：48、24,、12,、6、3,、1.5 ng/mL

【需要而未提供的試劑和器材】

1,、37℃恒溫箱

2、標準規(guī)格酶標儀

3,、精密移液器及一次性吸頭

4,、蒸餾水

5、一次性試管

6,、吸水紙

【操作步驟】

1,、準備：從冰箱取出試劑盒，室溫復溫平衡30分鐘,。

2,、配液：用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。

3,、加標準品和待測樣本：取足夠數(shù)量的酶標包被板,，固定于框架上，分別設置標準品孔,、待測樣本孔和空白對照孔,，記錄各孔位置,，在標準品孔中加入標準品50μL；待測樣本孔中先加入待測樣本10μL,，再加樣本稀釋液40μL（即樣本稀釋5倍）,；每孔再加入酶標工作液100μL；空白對照孔不加,。

4,、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5,、洗板：棄去液體,，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液,，靜置1min,，甩去洗滌液，吸水紙上拍干,，如此重復洗板5次（也可用洗板機按說明書操作洗板）,。

6、顯色：每孔先加入顯色劑A 液50μL,，再加入顯色劑B液 50μL,，37℃避光顯色15min。

7,、終止：取出酶標板,，每孔加終止液50μL，終止反應（顏色由藍色立轉黃色）,。

8,、測定：以空白孔調零，在終止后15分鐘內,，用450nm波長測量各孔的吸光值（OD值）,。

9、計算：根據標準品的濃度及對應的OD值,，計算出標準曲線的直線回歸方程,，再根據樣本的OD值，在回歸方程上計算出對應的樣品濃度,，也可以使用各種應用軟件來計算,。zui終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數(shù),。

【樣本要求】

1、樣本不能含疊氮鈉（NaN₃）,，因為疊氮鈉（NaN₃）是辣根過氧化物酶（HRP）的抑制劑,。

2,、標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行,，提取后應盡快進行實驗,。若不能立即試驗，可將標本放于-20℃保存,，但應避免反復凍融,。

3、樣本應充分離心,，不得有溶血及顆粒,。

【注意事項】

1、實驗嚴格按照說明書的操作進行,，實驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準,。

2、酶標包被板開封后如未用完,，應立即裝入密封袋中加干燥劑保存,。

3、建議所有的標準品,、樣本和空白對照都做雙份檢測,，取平均值，以減小實驗誤差,。

4,、若顯色過淺，可適當延長底物溫育時間,。

5,、為避免交叉污染，標準品,、樣本和空白對照每加一個就要更換一次吸頭,；酶標工作液、樣本稀釋液和底物等公共組分,，要懸臂加樣,，不得碰到微孔；不得重復使用封板膜,。

6,、試劑盒保質期內使用，不同批號的試劑不得混用,。

7,、底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下,。

【操作程序總結】

準備試劑,，樣品和標準品

加入準備好的樣品,、標準品和酶標工作液，37℃反應60分鐘

洗板5次,，加入顯色液A,、B，37℃顯色15分鐘

加入終止液

15分鐘之內讀OD值

計算

【檢測范圍】

1.5-48ng/mL

【規(guī)格】

48人份/盒

【貯藏】

2-8℃,，避光防潮保存,。

【有效期】

6個月

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