資料簡介
兔白細(xì)胞介素10(IL-10)定量檢測試劑盒(ELISA)
使用說明書
【試劑盒名稱】
兔白細(xì)胞介素10(IL-10)定量檢測試劑盒(ELISA)
【試劑盒用途】
定量檢測兔血清,、血漿及相關(guān)液體樣本中白細(xì)胞介素10(IL-10)的含量。
:-55123867 手機(jī):-
【檢測原理】
本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)。將標(biāo)準(zhǔn)品,、待測樣本加入到預(yù)先包被兔白細(xì)胞介素10(IL-10)抗體透明酶標(biāo)包被板中,,溫育足夠時(shí)間后,洗滌除去未結(jié)合的成分,,再加入酶標(biāo)工作液,,溫育足夠時(shí)間后,洗滌除去未結(jié)合的成分,。依次加入底物A,、B,底物(TMB)在辣根過氧化物酶(HRP)催化下轉(zhuǎn)化為藍(lán)色產(chǎn)物,,在酸的作用下變成黃色,,顏色的深淺與樣品中兔白細(xì)胞介素10(IL-10)濃度呈正相關(guān),450nm波長下測定OD值,,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的OD值,,計(jì)算樣本中兔白細(xì)胞介素10(IL-10)含量。
【試劑盒組成】
1 | 酶標(biāo)包被板 | 12孔×8條 | 7 | 顯色劑B液 | 6mL |
2 | 標(biāo)準(zhǔn)品 | 0.3mL*6管 | 8 | 終止液 | 6mL |
3 | 20倍濃縮洗滌液 | 25mL | 9 | 說明書 | 1份 |
4 | 生物素 | 1mL | 10 | 封板膜 | 2張 |
5 | 酶標(biāo)試劑 | 10mL | 11 | 密封袋 | 1個 |
6 | 顯色劑A液 | 6mL | | | |
備注:標(biāo)準(zhǔn)品(S0→S5)濃度依次為:64,、32,、16、8,、4,、0 ng/L.
【需要而未提供的試劑和器材】
1、37℃恒溫箱
2,、標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀
3,、精密移液器及一次性吸頭
4、蒸餾水
5,、一次性試管
6,、吸水紙
【操作步驟】
1,、準(zhǔn)備:從冰箱取出試劑盒,室溫復(fù)溫平衡30分鐘,。
2,、配液:用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。
3,、設(shè)置加樣孔:取足夠數(shù)量的酶標(biāo)包被板,,固定于框架上,分別設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔,、待測樣本孔和空白對照孔,,記錄各孔位置。
4,、加標(biāo)準(zhǔn)品:標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μL,;空白對照孔不加。
5,、加待測樣本:待測樣本孔中先加入生物素10μL,,再加待測樣本50μL;空白對照孔不加,。
6,、加酶標(biāo)工作液:每孔加入酶標(biāo)工作液100μL;空白對照孔不加,。
7,、溫育:37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
8,、洗板:棄去液體,,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,,靜置1min,甩去洗滌液,,吸水紙上拍干,,如此重復(fù)洗板4次(也可用洗板機(jī)按說明書操作洗板)。
9,、顯色:每孔先加入顯色劑A 液50μL,,再加入顯色劑B液 50μL,37℃避光顯色15min,。
10,、終止:取出酶標(biāo)板,每孔加終止液50μL,,終止反應(yīng)(顏色由藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色),。
11,、測定:以空白孔調(diào)零,在終止后15分鐘內(nèi),,用450nm波長測量各孔的吸光值(OD值),。
12、計(jì)算:根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對應(yīng)的OD值,,計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程,,再根據(jù)樣本的OD值,在回歸方程上計(jì)算出對應(yīng)的樣品濃度,,也可以使用各種應(yīng)用軟件來計(jì)算,。zui終濃度為實(shí)際測定濃度乘以稀釋倍數(shù)。
【樣本要求】
1,、樣本不能含疊氮鈉(NaN3),,因?yàn)?/span>疊氮鈉(NaN3)是辣根過氧化物酶(HRP)的抑制劑。
2,、標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn),。若不能立即試驗(yàn),,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。
3,、樣本應(yīng)充分離心,不得有溶血及顆粒,。
【注意事項(xiàng)】
1,、實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),。
2,、酶標(biāo)包被板開封后如未用完,應(yīng)立即裝入密封袋中加干燥劑保存,。
3,、建議所有的標(biāo)準(zhǔn)品、樣本和空白對照都做雙份檢測,,取平均值,,以減小實(shí)驗(yàn)誤差。
4,、若顯色過淺,,可適當(dāng)延長底物溫育時(shí)間。
5、為避免交叉污染,,標(biāo)準(zhǔn)品,、樣本和空白對照每加一個就要更換一次吸頭;酶標(biāo)工作液,、樣本稀釋液和底物等公共組分,,要懸臂加樣,不得碰到微孔,;不得重復(fù)使用封板膜,。
6、試劑盒保質(zhì)期內(nèi)使用,,不同批號的試劑不得混用,。
7、底物B對光敏感,,避免長時(shí)間暴露于光下,。
【操作程序總結(jié)】
準(zhǔn)備試劑,樣品和標(biāo)準(zhǔn)品
計(jì)算
【檢測范圍】
2ng/L - 64ng/L
【規(guī)格】
96T/盒
【貯藏】
2-8℃,避光防潮保存,。
【有效期】
6個月
上海裕平生物科技有限公司主要經(jīng)營各種品牌檔次的ELISA試劑盒,,*,售后服務(wù)完善,。并提供免費(fèi)代檢測,。服務(wù)于高校及免疫學(xué)科研單位。技術(shù)人員更好的為您服務(wù),。
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