兔白細(xì)胞介素10（IL-10）定量檢測(cè)試劑盒（ELISA）

使用說(shuō)明書

【試劑盒名稱】

兔白細(xì)胞介素10（IL-10）定量檢測(cè)試劑盒（ELISA）

【試劑盒用途】

定量檢測(cè)兔血清,、血漿及相關(guān)液體樣本中白細(xì)胞介素10（IL-10）的含量,。

 上海裕平生物科技公司高品質(zhì)ELISA試劑盒供應(yīng)商,，品質(zhì),，價(jià)格實(shí)惠,，售后完善,，并提供免費(fèi)代檢測(cè)服務(wù),。
：-55123867  手機(jī):-    

【檢測(cè)原理】

本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）,。將標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)樣本加入到預(yù)先包被兔白細(xì)胞介素10（IL-10）抗體透明酶標(biāo)包被板中,，溫育足夠時(shí)間后,，洗滌除去未結(jié)合的成分，再加入酶標(biāo)工作液,，溫育足夠時(shí)間后,，洗滌除去未結(jié)合的成分。依次加入底物A,、B,，底物（TMB）在辣根過(guò)氧化物酶（HRP）催化下轉(zhuǎn)化為藍(lán)色產(chǎn)物，在酸的作用下變成黃色,，顏色的深淺與樣品中兔白細(xì)胞介素10（IL-10）濃度呈正相關(guān),，450nm波長(zhǎng)下測(cè)定OD值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的OD值,，計(jì)算樣本中兔白細(xì)胞介素10（IL-10）含量,。

【試劑盒組成】

備注：標(biāo)準(zhǔn)品（S0→S5）濃度依次為：64、32,、16,、8、4,、0 ng/L.

【需要而未提供的試劑和器材】

1,、37℃恒溫箱

2、標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀

3,、精密移液器及一次性吸頭

4,、蒸餾水

5、一次性試管

6,、吸水紙

【操作步驟】

1,、準(zhǔn)備：從冰箱取出試劑盒，室溫復(fù)溫平衡30分鐘,。

2,、配液：用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。

3,、設(shè)置加樣孔：取足夠數(shù)量的酶標(biāo)包被板,，固定于框架上,，分別設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣本孔和空白對(duì)照孔,，記錄各孔位置,。

4、加標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μL,；空白對(duì)照孔不加,。

5,、加待測(cè)樣本：待測(cè)樣本孔中先加入生物素10μL,，再加待測(cè)樣本50μL；空白對(duì)照孔不加,。

6,、加酶標(biāo)工作液：每孔加入酶標(biāo)工作液100μL；空白對(duì)照孔不加,。

7,、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

8,、洗板：棄去液體,，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液,，靜置1min,，甩去洗滌液，吸水紙上拍干,，如此重復(fù)洗板4次（也可用洗板機(jī)按說(shuō)明書操作洗板）,。

9、顯色：每孔先加入顯色劑A 液50μL,，再加入顯色劑B液 50μL,，37℃避光顯色15min。

10,、終止：取出酶標(biāo)板,，每孔加終止液50μL，終止反應(yīng)（顏色由藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）,。

11,、測(cè)定：以空白孔調(diào)零，在終止后15分鐘內(nèi),，用450nm波長(zhǎng)測(cè)量各孔的吸光值（OD值）,。

12、計(jì)算：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對(duì)應(yīng)的OD值,，計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程,，再根據(jù)樣本的OD值,，在回歸方程上計(jì)算出對(duì)應(yīng)的樣品濃度，也可以使用各種應(yīng)用軟件來(lái)計(jì)算,。zui終濃度為實(shí)際測(cè)定濃度乘以稀釋倍數(shù),。

【樣本要求】

1、樣本不能含疊氮鈉（NaN₃）,，因?yàn)?/span>疊氮鈉（NaN₃）是辣根過(guò)氧化物酶（HRP）的抑制劑,。

2、標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能立即試驗(yàn),，可將標(biāo)本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

3,、樣本應(yīng)充分離心,，不得有溶血及顆粒。

【注意事項(xiàng)】

1,、實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格按照說(shuō)明書的操作進(jìn)行,，實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。

2,、酶標(biāo)包被板開封后如未用完,，應(yīng)立即裝入密封袋中加干燥劑保存。

3,、建議所有的標(biāo)準(zhǔn)品,、樣本和空白對(duì)照都做雙份檢測(cè)，取平均值,，以減小實(shí)驗(yàn)誤差,。

4、若顯色過(guò)淺,，可適當(dāng)延長(zhǎng)底物溫育時(shí)間,。

5、為避免交叉污染,，標(biāo)準(zhǔn)品,、樣本和空白對(duì)照每加一個(gè)就要更換一次吸頭；酶標(biāo)工作液,、樣本稀釋液和底物等公共組分,，要懸臂加樣，不得碰到微孔,；不得重復(fù)使用封板膜,。

6,、試劑盒保質(zhì)期內(nèi)使用，不同批號(hào)的試劑不得混用,。

7,、底物B對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下,。

【操作程序總結(jié)】

準(zhǔn)備試劑,，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品

加入準(zhǔn)備好的樣品、標(biāo)準(zhǔn)品和酶標(biāo)試劑,，37℃反應(yīng)60分鐘

洗板4次,，加入顯色液A、B,，37℃顯色15分鐘

加入終止液

15分鐘之內(nèi)讀OD值

計(jì)算

【檢測(cè)范圍】

2ng/L - 64ng/L

【規(guī)格】

96T/盒

【貯藏】

2-8℃,，避光防潮保存,。

【有效期】

6個(gè)月

   上海裕平生物科技有限公司主要經(jīng)營(yíng)各種品牌檔次的ELISA試劑盒,，*，售后服務(wù)完善,。并提供免費(fèi)代檢測(cè),。服務(wù)于高校及免疫學(xué)科研單位。技術(shù)人員更好的為您服務(wù),。
本公司的更多產(chǎn)品,，請(qǐng)點(diǎn)擊公司：http://www.yupingbio.com/