兔白細(xì)胞介素10（IL-10）定量檢測試劑盒（ELISA）

使用說明書

【試劑盒名稱】

兔白細(xì)胞介素10（IL-10）定量檢測試劑盒（ELISA）

【試劑盒用途】

定量檢測兔血清,、血漿及相關(guān)液體樣本中白細(xì)胞介素10（IL-10）的含量。

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【檢測原理】

本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）。將標(biāo)準(zhǔn)品,、待測樣本加入到預(yù)先包被兔白細(xì)胞介素10（IL-10）抗體透明酶標(biāo)包被板中,，溫育足夠時(shí)間后，洗滌除去未結(jié)合的成分,，再加入酶標(biāo)工作液,，溫育足夠時(shí)間后，洗滌除去未結(jié)合的成分,。依次加入底物A,、B，底物（TMB）在辣根過氧化物酶（HRP）催化下轉(zhuǎn)化為藍(lán)色產(chǎn)物,，在酸的作用下變成黃色,，顏色的深淺與樣品中兔白細(xì)胞介素10（IL-10）濃度呈正相關(guān)，450nm波長下測定OD值,，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的OD值,，計(jì)算樣本中兔白細(xì)胞介素10（IL-10）含量。

【試劑盒組成】

備注：標(biāo)準(zhǔn)品（S0→S5）濃度依次為：64,、32,、16、8,、4,、0 ng/L.

【需要而未提供的試劑和器材】

1、37℃恒溫箱

2,、標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀

3,、精密移液器及一次性吸頭

4、蒸餾水

5,、一次性試管

6,、吸水紙

【操作步驟】

1,、準(zhǔn)備：從冰箱取出試劑盒，室溫復(fù)溫平衡30分鐘,。

2,、配液：用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。

3,、設(shè)置加樣孔：取足夠數(shù)量的酶標(biāo)包被板,，固定于框架上，分別設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔,、待測樣本孔和空白對照孔,，記錄各孔位置。

4,、加標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μL,；空白對照孔不加。

5,、加待測樣本：待測樣本孔中先加入生物素10μL,，再加待測樣本50μL；空白對照孔不加,。

6,、加酶標(biāo)工作液：每孔加入酶標(biāo)工作液100μL；空白對照孔不加,。

7,、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

8,、洗板：棄去液體,，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液,，靜置1min，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干,，如此重復(fù)洗板4次（也可用洗板機(jī)按說明書操作洗板）。

9,、顯色：每孔先加入顯色劑A 液50μL,，再加入顯色劑B液 50μL，37℃避光顯色15min,。

10,、終止：取出酶標(biāo)板，每孔加終止液50μL,，終止反應(yīng)（顏色由藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）,。

11,、測定：以空白孔調(diào)零，在終止后15分鐘內(nèi),，用450nm波長測量各孔的吸光值（OD值）,。

12、計(jì)算：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對應(yīng)的OD值,，計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程,，再根據(jù)樣本的OD值，在回歸方程上計(jì)算出對應(yīng)的樣品濃度,，也可以使用各種應(yīng)用軟件來計(jì)算,。zui終濃度為實(shí)際測定濃度乘以稀釋倍數(shù)。

【樣本要求】

1,、樣本不能含疊氮鈉（NaN₃）,，因?yàn)?/span>疊氮鈉（NaN₃）是辣根過氧化物酶（HRP）的抑制劑。

2,、標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn),。若不能立即試驗(yàn),，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。

3,、樣本應(yīng)充分離心，不得有溶血及顆粒,。

【注意事項(xiàng)】

1,、實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),。

2,、酶標(biāo)包被板開封后如未用完，應(yīng)立即裝入密封袋中加干燥劑保存,。

3,、建議所有的標(biāo)準(zhǔn)品、樣本和空白對照都做雙份檢測,，取平均值,，以減小實(shí)驗(yàn)誤差。

4,、若顯色過淺,，可適當(dāng)延長底物溫育時(shí)間。

5、為避免交叉污染,，標(biāo)準(zhǔn)品,、樣本和空白對照每加一個就要更換一次吸頭；酶標(biāo)工作液,、樣本稀釋液和底物等公共組分,，要懸臂加樣，不得碰到微孔,；不得重復(fù)使用封板膜,。

6、試劑盒保質(zhì)期內(nèi)使用,，不同批號的試劑不得混用,。

7、底物B對光敏感,，避免長時(shí)間暴露于光下,。

【操作程序總結(jié)】

準(zhǔn)備試劑，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品

加入準(zhǔn)備好的樣品,、標(biāo)準(zhǔn)品和酶標(biāo)試劑,，37℃反應(yīng)60分鐘

洗板4次，加入顯色液A,、B,，37℃顯色15分鐘

加入終止液

15分鐘之內(nèi)讀OD值

計(jì)算

【檢測范圍】

2ng/L - 64ng/L

【規(guī)格】

96T/盒

【貯藏】

2-8℃，避光防潮保存,。

【有效期】

6個月

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