資料簡介
人單純皰疹病毒Ⅱ型抗體(HSVⅡAb)ELISA檢測試劑盒
使用說明書
檢測原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA),。往預(yù)先包被人單純皰疹病毒Ⅱ型抗體(HSVⅡAb)捕獲抗體的包被微孔中,,依次加入標(biāo)本,、標(biāo)準(zhǔn)品,、HRP標(biāo)記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并*洗滌,。用底物TMB顯色,,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的人單純皰疹病毒Ⅱ型抗體(HSVⅡAb)呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度,。
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樣品收集,、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,,3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離,。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝,。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清,。
3. 細(xì)胞上清液:3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎,。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清,。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,,凍存于
自備物品
1. 酶標(biāo)儀(450nm)
2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL,、2-20uL、20-200uL,、200-1000uL
3.
操作注意事項
1. 試劑盒保存在2
2. 實驗中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中,,密封(低溫干燥)保存,。
3. 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液即可視為陰性對照或者空白;預(yù)處理后的樣本無需稀釋,,直接取10μL加樣即可,。
4. 嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時間、加液量及順序進行溫育操作,。
5. 所有液體組分使用前充分搖勻,。
試劑盒組成
名稱 | 96孔配置 | 48孔配置 | 備注 |
微孔酶標(biāo)板 | 12孔×8條 | 12孔×4條 | 無 |
標(biāo)準(zhǔn)品(80ng/mL) | 0.6mL | 0.6mL | 按說明書進行稀釋 |
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 | 6mL | 3mL | 無 |
樣本稀釋液 | 6mL | 3mL | 無 |
檢測抗體-HRP | 10mL | 5mL | 無 |
20×洗滌緩沖液 | 25mL | 15mL | 按說明書進行稀釋 |
底物A | 6mL | 3mL | 無 |
底物B | 6mL | 3mL | 無 |
終止液 | 6mL | 3mL | 無 |
封板膜 | 2張 | 2張 | 無 |
說明書 | 1份 | 1份 | 無 |
自封袋 | 1個 | 1個 | 無 |
注:標(biāo)準(zhǔn)品用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液依次稀釋為:80、40,、20,、10,、5,、2.5 ng/mL.
試劑的準(zhǔn)備
20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水,。
洗板方法
1. 手工洗板:甩盡孔內(nèi)液體,,每孔加滿洗滌液,靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體,,在吸水紙上拍干,,如此洗板5次。
2. 自動洗板機:每孔注入洗液350μL,,浸泡1min,,洗板5次。
操作步驟
1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,,剩余板條用自封袋密封放回
2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL,;
3. 待測樣本孔先加待測樣本10μL,,再加樣本稀釋液40μL;
4. 隨后標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測抗體100μL,,用封板膜封住反應(yīng)孔,,
5. 棄去液體,,吸水紙上拍干,,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,,吸水紙上拍干,,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機洗板)。
6. 每孔加入底物A,、B各50μL,,
7. 每孔加入終止液50μL,,15min內(nèi),,在450nm波長處測定各孔的OD值。
結(jié)果判斷
繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線:在Excel工作表中,,以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo),,對應(yīng)OD值作縱坐標(biāo),繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線,,按曲線方程計算各樣本濃度值,。
試劑盒性能
1. 準(zhǔn)確性:標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值,大于等于0.9900,。
2. 靈敏度:zui低檢測濃度小于1.0 ng/mL,。
3. 特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
4. 重復(fù)性:板內(nèi),、板間變異系數(shù)均小于15%,。
5. 貯藏:2
6. 有效期:6個月
免責(zé)聲明
1. 試劑盒僅供研究使用,,不得用于臨床實驗或人體實驗,否則所產(chǎn)生的一切后果,,由實驗者承擔(dān),,本公司概不負(fù)責(zé)。
2. 嚴(yán)格按照說明書操作,,實驗者違反說明書操作,,后果由實驗者承擔(dān)。
上海裕平生物科技有限公司主要經(jīng)營各種品牌檔次的ELISA試劑盒,,*,,售后服務(wù)完善。并提供免費代檢測,。服務(wù)于高校及免疫學(xué)科研單位,。技術(shù)人員更好的為您服務(wù)。
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