大鼠8異前列腺素F2α（8-iso-PGF2α） ELISA檢測試劑盒

使用說明書

檢測原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被大鼠8異前列腺素F2α（8-iso-PGF2α）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,，經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠8異前列腺素F2α（8-iso-PGF2α）呈正相關,。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值）,，計算樣品濃度。

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樣品收集、處理及保存方法

1.  血清：使用不含熱原和內毒素的試管,，操作過程中避免任何細胞刺激,，收集血液后，3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離,。

2.  血漿：EDTA,、檸檬酸鹽或肝素抗凝,。3000轉離心30分鐘取上清。

3.  細胞上清液：3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物,。

4.  組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎,。3000轉離心10分鐘取上清。

5.  保存：如果樣本收集后不及時檢測,，請按一次用量分裝,，凍存于-20℃，避免反復凍融,，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。

自備物品

1.     酶標儀（450nm）

2.     高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL,、20-200uL,、200-1000uL

3.     37℃恒溫箱

操作注意事項

1.  試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘,。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶,，這屬于正常現象,，水浴加熱使結晶*溶解后再使用,。

2.  實驗中不用的板條應立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存,。

3.  標準品稀釋液即可視為陰性對照或者空白,；預處理后的樣本無需稀釋，直接取10μL加樣即可,。

4.  嚴格按照說明書中標明的時間,、加液量及順序進行溫育操作。

5.  所有液體組分使用前充分搖勻,。

試劑盒組成

注：標準品用標準品稀釋液依次稀釋為：80,、40、20,、10,、5、2.5 pg/mL.

試劑的準備

 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋,，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水,。

洗板方法

1.  手工洗板：甩盡孔內液體，每孔加滿洗滌液,，靜置1min后甩盡孔內液體,，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。

2.  自動洗板機：每孔注入洗液350μL,，浸泡1min,，洗板5次。

操作步驟

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回4℃,。

2.  設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL,；

3.  待測樣本孔先加待測樣本10μL,，再加樣本稀釋液40μL；

4.  隨后標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL,，用封板膜封住反應孔,，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.  棄去液體,，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液，靜置1min,，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）,。

6.  每孔加入底物A、B各50μL,，37℃避光孵育15min,。

7.  每孔加入終止液50μL，15min內,，在450nm波長處測定各孔的OD值,。

結果判斷

 繪制標準曲線：在Excel工作表中，以標準品濃度作橫坐標,，對應OD值作縱坐標,，繪制出標準品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值,。

試劑盒性能

1.  準確性：標準品線性回歸與預期濃度相關系數R值,，大于等于0.9900。

2.  靈敏度：zui低檢測濃度小于1.0pg/mL,。

3.  特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應,。

4.  重復性：板內、板間變異系數均小于15%,。

5.  貯藏：2-8℃,，避光防潮保存。

6.  有效期：6個月

免責聲明

1.   試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實驗或人體實驗,，否則所產生的一切后果,，由實驗者承擔，本公司概不負責,。

2.   嚴格按照說明書操作,，實驗者違反說明書操作，后果由實驗者承擔,。

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